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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白酶k消化
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雨中的雕塑

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白酶k消化

各位虫友，我是刚开始做分子，实验的目的提取鱼的dna，用的是鱼尾动脉血，用蛋白酶在60度水浴消化了3个小时，没跑出来条带，然后试着用蛋白酶在60度水浴消化了一夜结果一种鱼的dna条带跑出来了 ，另外的两种鱼的dna条带没有，求解？然后又试着用蛋白酶在60度水浴中消化了一夜加半天，然后发现又都没有条带了，求解？
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1楼 2012-04-06 21:39:43
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
雨中的雕塑: 金币+1 2012-04-08 10:36:30
我用蛋白酶K 消化的温度是56，过夜，一般是下午5点多放到水浴锅，第二天早上9点开始做实验
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2楼2012-04-07 21:45:49
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
雨中的雕塑: 金币+1, ★有帮助 2012-04-08 10:36:41
另外你做的基因的时候，有没有做个内参，还有，你的体系的各个浓度都对着么
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3楼2012-04-07 21:47:09
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雨中的雕塑

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-07 21:45:49:
我用蛋白酶K 消化的温度是56，过夜，一般是下午5点多放到水浴锅，第二天早上9点开始做实验

那跟我第二次做的时间是查不多的啊   为什么一条鱼dna条带跑出来了 另外两个条带没有出来那。。是不是酶的问题
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我愿天下人：人人得以智慧之光，去开启生命之真谛
4楼2012-04-08 10:35:48
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雨中的雕塑

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-07 21:47:09:
另外你做的基因的时候，有没有做个内参，还有，你的体系的各个浓度都对着么

体系各个浓度应该是没有问题的
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我愿天下人：人人得以智慧之光，去开启生命之真谛
5楼2012-04-08 10:36:19
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小小逍遥人

金虫 (正式写手)

张斌猪
引用回帖:
5楼: Originally posted by 雨中的雕塑 at 2012-04-08 10:36:19
体系各个浓度应该是没有问题的...

一般加蛋白酶K是效果是去除蛋白的，对提取实验是增强效果，比较大的可能是提取出问题，如果你怀疑酶有问题，那就要看你的蛋白酶K是不是DNAse和 RNAse free     如果不是  那就比较大的影响
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生命还需要奇迹来衬托
6楼2012-09-11 08:53:21
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天虫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们提基因组的时候一般用蛋白酶K 50度水浴消化五小时以上，很多都是过夜啊，挺好的。
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希望实验能顺利！
7楼2012-09-11 15:58:27
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