| 查看: 4697 | 回复: 16 | ||
xiangquanju金虫 (小有名气)
|
[求助]
做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
|
|
|
利用同源重组的原理，打算敲掉大肠杆菌的一个基因，以pKD4为模板，打算扩增一段带有卡那霉素抗性基因的片段，作为重组筛选的标记。 上下游引物均有70bp，其中20bp是和质粒模板互补的，其余50bp是和基因组上欲敲除的基因互补的。与质粒互补的20bp，Tm值分别为47和60，PCR一直都只有引物带，退火温度从30--50度都试过了，也尝试了pfu和KOD聚合酶，都没什么改进 所以恳请做过类似实验的虫友指点指点 |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有133人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复- 做过overlap PCR的虫子过来看看
已经有19人回复
- 如何做同源重组
已经有6人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 根据已知序列，从相同菌种(菌株编号不同)中能PCR出目的基因吗？
已经有6人回复
- 重组PCR验证时没有目的条带
已经有3人回复
- 【求助/交流】关于荧光定量PCR，做过的朋友请进来
已经有11人回复
- 【求助/交流】基因克隆时，酶切有结果，PCR却P不出来
已经有11人回复
- 【求助/交流】PCR求助，做不出来找不到原因
已经有16人回复
- 细菌同源重组进行基因敲除的同源臂最小需要多少
已经有10人回复
zhl4312
银虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 373.9
- 散金: 5
- 帖子: 49
- 在线: 13.4小时
- 虫号: 1614326
- 注册: 2012-02-13
- 性别: GG
- 专业: 食品科学基础
10楼2012-02-13 11:06:25
2楼2011-11-21 02:48:41
zhqsun2006
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1669.9
- 帖子: 46
- 在线: 144.5小时
- 虫号: 1393465
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
3楼2011-11-21 11:43:12
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
4楼2011-11-21 19:40:04
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
5楼2011-11-21 19:46:53
6楼2011-11-21 20:01:35
小白虾
木虫 (小有名气)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 3196.7
- 散金: 190
- 红花: 1
- 帖子: 300
- 在线: 418.1小时
- 虫号: 1390918
- 注册: 2011-09-05
- 专业: 临床微生物学检验
7楼2011-11-22 11:23:45
xiangquanju
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1519.7
- 散金: 245
- 红花: 1
- 帖子: 295
- 在线: 153.2小时
- 虫号: 999190
- 注册: 2010-04-17
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
8楼2011-11-22 20:16:17
zhqsun2006
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1669.9
- 帖子: 46
- 在线: 144.5小时
- 虫号: 1393465
- 注册: 2011-09-07
- 专业: 植物学研究的新技术、新方
9楼2011-11-24 11:18:43