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xiaoxiang5

银虫 (正式写手)

KOD
条件:
94 2min   
98 20sec 54 30sec 68  1.5min  40cycles
4 forever
你试下这个条件,呵呵。
11楼2012-03-13 10:32:57
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

我觉得不应该出现这种情况啊,我同源片段80个bp,加上引物20个bp,pcr都非常好p的~~~
12楼2012-03-13 11:02:22
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预防凯凯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡子1985 at 2011-11-21 02:48:41
这种PCR一定要注意 主要问题出在模版浓度上 还有问题出现在退火温度上 退火温度选择55°最为保险 主要考虑模版浓度吧  我们是实验室最常做的就是酵母基因的敲除  用的就是这种方法  百试不爽

我想问一个问题行吗,我也是Red同源做缺失的,但一直未成功,我想问,高度保守的序列能够用这种方法缺失一段这样的基因吗,我的是耐药基因,一直转打靶片段,转不进去,不能发生重组,这是什么原因,求助啊
13楼2014-03-26 14:49:07
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梳子zz

新虫 (初入文坛)

楼主 我现在遇到了跟你一模一样的问题 请问楼主问题解决了吗  最后怎么解决的啊?
14楼2014-09-15 19:58:42
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xiangquanju

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 梳子zz at 2014-09-15 19:58:42
楼主 我现在遇到了跟你一模一样的问题 请问楼主问题解决了吗  最后怎么解决的啊?

哦,我当时是模板用错了,重新提取了质粒模板就做出来了
15楼2014-09-16 15:13:42
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彼岸侬

新虫 (初入文坛)

用Red途径基因敲除,质粒浓度一般多少进行pcr合适?
16楼2014-12-18 15:04:56
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彼岸侬

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-03-13 11:02:22
我觉得不应该出现这种情况啊,我同源片段80个bp,加上引物20个bp,pcr都非常好p的~~~

你好,请问你的pcr体系是多少?质粒浓度呢?谢谢了
17楼2014-12-18 15:07:23
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