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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
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xiaoxiang5

银虫 (正式写手)
KOD
条件：
94 2min   
98 20sec 54 30sec 68  1.5min  40cycles
4 forever
你试下这个条件，呵呵。
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11楼2012-03-13 10:32:57
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hyacinth326

金虫 (正式写手)
我觉得不应该出现这种情况啊，我同源片段80个bp，加上引物20个bp，pcr都非常好p的~~~
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12楼2012-03-13 11:02:22
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预防凯凯

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 凡子1985 at 2011-11-21 02:48:41
这种PCR一定要注意 主要问题出在模版浓度上 还有问题出现在退火温度上 退火温度选择55°最为保险 主要考虑模版浓度吧  我们是实验室最常做的就是酵母基因的敲除  用的就是这种方法  百试不爽

我想问一个问题行吗，我也是Red同源做缺失的，但一直未成功，我想问，高度保守的序列能够用这种方法缺失一段这样的基因吗，我的是耐药基因，一直转打靶片段，转不进去，不能发生重组，这是什么原因，求助啊
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13楼2014-03-26 14:49:07
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梳子zz

新虫 (初入文坛)
楼主 我现在遇到了跟你一模一样的问题 请问楼主问题解决了吗  最后怎么解决的啊？
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14楼2014-09-15 19:58:42
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xiangquanju

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 梳子zz at 2014-09-15 19:58:42
楼主 我现在遇到了跟你一模一样的问题 请问楼主问题解决了吗  最后怎么解决的啊？

哦，我当时是模板用错了，重新提取了质粒模板就做出来了
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15楼2014-09-16 15:13:42
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彼岸侬

新虫 (初入文坛)
用Red途径基因敲除，质粒浓度一般多少进行pcr合适？
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16楼2014-12-18 15:04:56
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彼岸侬

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-03-13 11:02:22
我觉得不应该出现这种情况啊，我同源片段80个bp，加上引物20个bp，pcr都非常好p的~~~

你好，请问你的pcr体系是多少？质粒浓度呢？谢谢了
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17楼2014-12-18 15:07:23
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