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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助内切酶的问题
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383639931

银虫 (著名写手)

[求助] 求助内切酶的问题

请问一下，只要双链中含有某种内切酶识别的特定序列，这条双链一定能被那个内切酶所剪切吗？比如序列

5'-GGT CTT CGT GGC CGG CGT TCA-3'

5'-TGA ACG CCG GCC ACG AAG ACC-3'

一定能被识别序列5' CCGG 3'

                            3' GGCC 5'

的内切酶所剪切吗？
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1楼 2011-11-19 17:52:09
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

383639931(金币+4): 请问一下你能帮我找有关疾病的DNA序列并且被内切酶剪切的吗？我是学化学的，急求啊，这个双链是我在文献上看到的，但是不知道剪切的效果，我上个实验失败了，急需要做得起来的序列 2011-11-20 19:09:49
不一定：首先，有的内切酶需要保护碱基，如果是PCR产物带的酶切位点做酶切时可以连到载体上或者合成引物时连上保护碱基。其次，有些碱基会被修饰导致内切酶切不动识别序列，供楼主参考！
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jiayoubashaonian
2楼2011-11-19 21:30:55
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凡子1985

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

383639931(金币+2): 什么是保护碱基啊？我不懂啊，这个双链是我在文献上看到的，不知道合不合适？ 2011-11-20 19:07:19
从序列来看 一定能 没社么好说的 保护碱基也够了
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3楼2011-11-20 05:49:10
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

383639931(金币+2): 谢谢 ，啊怎么确定保护碱基的序列呢？我是学化学的，对生物不懂的 2011-11-20 19:05:39
从序列上来说，应该可以切开，但是切割效率是不能确定的。如果的你序列是一个线性的，切割效率与保护碱基的序列有很大关系。
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平生我自知
4楼2011-11-20 11:26:29
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

如果没有受到甲基化的影响一般是没有问题的
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5楼2011-11-20 11:36:17
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-19 21:30:55:
不一定：首先，有的内切酶需要保护碱基，如果是PCR产物带的酶切位点做酶切时可以连到载体上或者合成引物时连上保护碱基。其次，有些碱基会被修饰导致内切酶切不动识别序列，供楼主参考！

楼主是要找和某个疾病有关的基因吗？
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jiayoubashaonian
6楼2011-11-20 19:27:52
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凡子1985

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

383639931(金币+2): 我用的就是上边我写出的碱基序列，个数也是那么多的，只不过在链端要修饰一些基团 2011-11-21 08:20:39
如果你说的只是一段序列里面的这一段的话 那就一点问题都没有 所谓保护碱基是限制性内切酶起作用一般需要在序列内部 就就是说 如果你设计引物后PCR 酶切 这个时候引物设计的酶切位点后需要加上几个碱基 目的就是为了把酶切位点放到内部 称为保护碱基 不同内切酶喜欢的保护碱基不一样 要究其原因的话 就是内切酶起作用时是需要占据一定数量的序列位置的 所以当酶切位点在序列的末尾 一般酶切效率不好
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7楼2011-11-20 19:30:46
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ybs007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by ybs007 at 2011-11-20 11:26:29:
从序列上来说，应该可以切开，但是切割效率是不能确定的。如果的你序列是一个线性的，切割效率与保护碱基的序列有很大关系。

你去百度文库上搜一下 酶切位点保护碱基  就知道了
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平生我自知
8楼2011-11-20 22:49:01
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383639931

银虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-20 19:27:52:
楼主是要找和某个疾病有关的基因吗？

是的最好是有相应的内切酶内能切开疾病的DNA序列，一般21个碱基就够了
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9楼2011-11-21 08:17:32
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