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雪湛蓝

铁杆木虫 (正式写手)

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[求助] PCR引物设计的问题

我第一次自己设计PCR引物，而且目的基因的5‘端已知，3’端未知，找到了同类基因3‘端的保守序列，保守性比较高，然而我找到的引物与目的基因的结合率一个在82%左右，另一个70%左右（保守序列端引物），不知道能否P出条带？我的目的是要克隆出未知的目的基因然后测序，所以引物两端不需要加酶切位点，只是不知道是否还需要加保护碱基呢？

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脚踏实地追求科学真理！

1楼 2011-11-19 09:49:57

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muyanshuang

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

雪湛蓝(金币+2): 对于我们实验室，这个建议很好！谢谢啦！ 2011-11-24 20:12:48

引用回帖:

6楼: Originally posted by 雪湛蓝 at 2011-11-24 10:11:09:
我现在只知道这个基因的5‘端的序列，另外一段不知道，而同源序列是根据其他几种菌找的它们的3’端同原序列，猜测可能与我目的基因的3‘序列的相同，所以才这样设计的。用的软件是PrimePrimer5。

同源性比对设计引物本身就带有一定的预测性，一定的概率可以成功。
可以先设计出来做一下，看看结果。然后决定是否做基因组步移。