| 查看: 983 | 回复: 1 | ||
centian2004金虫 (正式写手)
|
[求助]
我该如何表达我的膜蛋白
|
|
各位老师： 您们好！近来，我刚刚做真核表达一个膜蛋白受体，检测这个受体的吞噬功能。对于一个新手来说，实在是碰到了很多难处。想请教大家，希望能得到帮助。 我查了我所要表达的膜蛋白情况，mRNA有2个isoforms（1型和2型），但由同一基因编码。看了一些文献，决定表达2型的这个膜蛋白受体。有几个问题请教： 1） 我表达这个受体，是不是只需要表达CDS部分就可以了吗？（这一部分有起始密码子和终止密码子） 2） 如果只表达CDS部分，翻译后的蛋白会在细胞膜上出现吗？这种在膜上的信息是否在CDS中？ 3） 我用verctor 软件看了mRNA结构，发现除了CDS外，还有好多exon，这些enox表达蛋白吗？（CDS只包含了部分enox）我看了这些exon第一个密码子，不是表达蛋白的起始密码子ATG，我想知道这些exon有什么作用，对CDS会有什么影响。 4） 我在查找这个受体时，genebank以C57BL小黑鼠的mRNA，而我所需要的是Balb/c的mRNA则没有。用C57BL的CDS为模板设计引物，会不会不能扩增不出来这个蛋白表达RNA。即C57BL 和Balb/c 这个蛋白的RNA差异大吗？我该怎么办？ 我所表达的这个膜蛋白是：CD204（小鼠）。谢谢大家！ [ Last edited by centian2004 on 2011-11-18 at 22:45 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有244人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 提膜蛋白裂解液配方
已经有12人回复
- PICZaA在GS115内表达跨膜蛋白
已经有30人回复
- 【求助/交流】测水稻叶片单位膜蛋白中H-ATPase（一种酶）的量的方法
已经有3人回复
- 【求助/交流】求高手指点！关于用C43（DE3)表达膜蛋白
已经有4人回复
- 【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？
已经有9人回复
- 【求助/交流】做过膜蛋白表达的看过来
已经有12人回复
- 【求助/交流】膜蛋白表达
已经有9人回复
- 【求助/交流】膜蛋白表达
已经有9人回复
【答案】应助回帖
centian2004(金币+40): 谢谢您！ 2011-11-19 12:40:21
|
1） 我表达这个受体，是不是只需要表达CDS部分就可以了吗？（这一部分有起始密码子和终止密码子） 对 2） 如果只表达CDS部分，翻译后的蛋白会在细胞膜上出现吗？这种在膜上的信息是否在CDS中？ 对 3） 我用verctor 软件看了mRNA结构，发现除了CDS外，还有好多exon，这些enox表达蛋白吗？（CDS只包含了部分enox）我看了这些exon第一个密码子，不是表达蛋白的起始密码子ATG，我想知道这些exon有什么作用，对CDS会有什么影响。 为什么要用软件看mRNA的结构呢，所有外含子和CDS信息在NCBI上都显示了啊，CDS是包含在exon里面的，比如有些基因有3个外显子，但实际编码蛋白的只是其中的一个内含子的一段序列，其实这个问题很简单，所谓外含子就是最后在成熟mRNA中出现的序列，所谓CDS就是最后在蛋白质中对应的序列，mRNA不一定整个都翻译成蛋白，所以你表达蛋白时只需扩增你的CDS片段就好了，当然只是针对你表达蛋白而言，要研究其他的就另当别论了，至于不编码的外显子序列当然是有作用的，但作用不一 4） 我在查找这个受体时，genebank以C57BL小黑鼠的mRNA，而我所需要的是Balb/c的mRNA则没有。用C57BL的CDS为模板设计引物，会不会不能扩增不出来这个蛋白表达RNA。即C57BL 和Balb/c 这个蛋白的RNA差异大吗？我该怎么办？ 你只要查到小鼠的序列就行了，而不管他提供的小鼠的品系，记住品系和种差别很大，一般的品系之间基因差别几乎可以忽略不计，SNP的差别而已。所以放心做。 我所表达的这个膜蛋白是：CD204（小鼠）。谢谢大家！ |
2楼2011-11-19 05:32:00
