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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Taqman实时荧光定量PCR本地信号过强是什么原因？
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appletreelym

铜虫 (初入文坛)

[求助] Taqman实时荧光定量PCR本地信号过强是什么原因？

本人最近做Taqman实时荧光定量PCR是常出现一个问题，本底信号非常高，如下图，是什么原因导致的呢？
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1楼 2011-11-16 14:34:41
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): Good! 鼓励新虫友参加交流！ 2011-11-16 16:18:27
有些仪器是要加校正染料的，以便消除本地信号的干扰，是不是没加校正染料呢？
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2楼2011-11-16 16:12:12
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2011-11-16 18:10:54
看你的扩增曲线都在40个循环左右了，说明你的模板浓度过低，扩增信号当然也就低了，如果不是模板浓度过低的原因，就有可能是探针杂交效率低，这样就显得本底很高，你把扩增曲线弄成线性的看下
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3楼2011-11-16 16:58:56
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appletreelym

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liweiwei0812 at 2011-11-16 16:12:12:
有些仪器是要加校正染料的，以便消除本地信号的干扰，是不是没加校正染料呢？

我用的仪器是BIO-RAD CFX96 ，操作说明上没说要加校正染料。一般校正染料是自己买的还是仪器附带的？
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4楼2011-11-17 10:40:01
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appletreelym

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2011-11-16 16:58:56:
看你的扩增曲线都在40个循环左右了，说明你的模板浓度过低，扩增信号当然也就低了，如果不是模板浓度过低的原因，就有可能是探针杂交效率低，这样就显得本底很高，你把扩增曲线弄成线性的看下

这是线性图，麻烦您帮我看一下，谢谢！探针杂交效率低是什么原因呢？退火温度？
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5楼2011-11-17 10:47:42
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


appletreelym(金币+3): 2011-11-17 10:56:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by appletreelym at 2011-11-17 10:47:42:
这是线性图，麻烦您帮我看一下，谢谢！探针杂交效率低是什么原因呢？退火温度？

看不到你的全景图，探针效率低，可能是和设计有关，多做几次，一两次实验说明不了问题
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appletreelym
6楼2011-11-17 10:49:19
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appletreelym

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by love_st at 2011-11-17 10:49:19:
看不到你的全景图，探针效率低，可能是和设计有关，多做几次，一两次实验说明不了问题

嗯，先自己摸索一下吧。谢谢！
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7楼2011-11-17 10:55:59
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六妖妖

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

baseline扣除不对。自定义下baseline就好了。试一下baseline扣除从2到18个循环。
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8楼2012-10-10 13:22:23
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