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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » cDNA 全长判断
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dorothy

金虫 (小有名气)

[交流] cDNA 全长判断

我用tail  PCR 得到了目的基因，orffinder 也找到了编码区和内含子，接下来RT-PCR 扩增cDNA 验证内含子的位置，可是我怎么判断cDNA 的5‘UTR和3’UTR呢？
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1楼 2011-11-14 21:54:39
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纳兰欣光

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-21 18:58:03:
根据得到的序列，从ATG开始到终止密码子直接设计引物扩增ORF，如果要连载体的话直接加上酶切位点。

谢谢啦！不过还是不很明白啊，那上游引物就是从ATG开始数20几个碱基吗？下游引物就是从TAG开始往前数20几个碱基吗？还有我用的反转录酶是TAKARA的M-MLV，论坛中有的说，这个酶可能不能把mRNA反转到头，可能导致约2000bp的全长验证PCR不出来。。。
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13楼2011-11-22 09:40:39
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★
dorothy(金币+1):谢谢参与
dorothy(金币+1): 2011-11-16 11:31:33
先克隆全长cDNA，然后与基因组DNA序列比较。
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2楼2011-11-15 10:09:09
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★
dorothy(金币+1):谢谢参与
dorothy(金币+1): 2011-11-16 11:31:45
5'RACE和3‘RACE技术确定全长序列
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3楼2011-11-15 10:10:47
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dorothy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by blackrose8089 at 2011-11-15 10:10:47:
5'RACE和3‘RACE技术确定全长序列

呵呵，关键是用不着RACE啊
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4楼2011-11-16 11:32:54
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