应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 某基因在某些大麦品系很难扩出的原因
51/1返回列表
查看: 902  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

hqc87

铁虫 (小有名气)

[求助] 某基因在某些大麦品系很难扩出的原因

设计了引物想扩大麦的一个转录因子基因，用的就是基因组DNA做模板来扩增，模板质量经检测没有问题，浓度调整到200ng/ul左右用于扩增的，此基因GC含量70%，加了DMSO还是轻易能扩出，问题是我有八个大麦品种，为什么两个品种条带很弱很弱，其他六个很亮很亮，重复几次还是这样，考虑到引物区在这两个品种中存在SNP的可能性，所以又设计了一对引物，结果扩增结果还是那两个品种很弱，有可能是这两个品系中该基因拷贝少么？还有其他原因么？请各位看官、大虾分析分析

[ Last edited by hqc87 on 2011-11-3 at 21:24 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物科学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-03 21:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

hqc87(金币+1): 谢谢回复！ 2011-11-16 23:11:02
高GC含量的区域有时会这样的。你可以试试TAKARA的EX taq 配上 GC buffer。这套组合在我们实验室里用来扩高GC含量模板效果蛮好的
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
2楼2011-11-16 08:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqc87

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-16 08:47:12:
高GC含量的区域有时会这样的。你可以试试TAKARA的EX taq 配上 GC buffer。这套组合在我们实验室里用来扩高GC含量模板效果蛮好的

谢谢回复！我在扩增时也加了DMSO 问题是在模板DNA的质量保证都没问题的情况下，为什么6个大麦品种能扩出很强的带，而其他两个品种却很弱很弱？
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-16 23:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-17 12:25:15
hqc87(金币+4): 2011-11-18 05:14:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqc87 at 2011-11-16 23:09:54:
谢谢回复！我在扩增时也加了DMSO 问题是在模板DNA的质量保证都没问题的情况下，为什么6个大麦品种能扩出很强的带，而其他两个品种却很弱很弱？

既然是不同品种，那片段序列就可能不同啊。
第一点：有时候高GC含量区域并不是简单的加DMSO就能解决的，DMSO的量也有讲究的，而一些复杂二级结构的区域也会造成扩增效果不好，商品化的buffer比你自己加DMSO要好一些，也不贵，就几十块钱而已。TAKARA的GCbuffer就有两种，可见这类buffer的最佳配方要根据情况而定呢。
第二点：既然是不同的品系，那么序列就会有差异，你确定你选择的引物互补序列是绝对保守的吗？？有没有可能那两个品系里引物互补序列发生变化导致不完美互补？？
赞一下(1人) 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-11-17 08:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqc87

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-17 08:58:07:
既然是不同品种，那片段序列就可能不同啊。
第一点：有时候高GC含量区域并不是简单的加DMSO就能解决的，DMSO的量也有讲究的，而一些复杂二级结构的区域也会造成扩增效果不好，商品化的buffer比你自己加DMSO要好 ...

这个我也考虑过引物结合序列存在SNP的可能性，所以重新设计了另一对引物，两对引物的结果都是这两个品种条带很弱，但条带大小和其他品种一样，明天试着把这两个品种的扩增产物做模板进行二次扩增，看能不能得到强的条带 然后克隆测序看看 到底怎么回事，谢谢给我思考这个问题 金币都送给你了 呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-18 05:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hqc87 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +16 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-05 16/800 2026-04-08 16:02 by luoyongfeng
[考研] 285求调剂 +7 恶法大二的气味� 2026-04-05 10/500 2026-04-08 14:34 by zhq0425
[考研] 085404，285分求调剂 +4 薇薇考研 2026-04-07 4/200 2026-04-08 14:32 by zhq0425
[考研] 280求调剂 +9 李rien 2026-04-04 9/450 2026-04-08 13:20 by lijunpoly
[考研] 304求调剂 +16 c297914 2026-04-05 17/850 2026-04-08 13:00 by grayjzr
[考研] 362求调剂 +8 我要考大 2026-04-06 12/600 2026-04-08 00:32 by JourneyLucky
[考研] 计算机408｜在校多次国家级竞赛获奖｜申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 专硕085403，291分，有两篇专利，一国一奖 +3 哈吉咪哈吉咪 2026-04-07 3/150 2026-04-07 18:21 by 蓝云思雨
[考研] 085404 293求调剂 +8 勇远库爱314 2026-04-06 9/450 2026-04-07 13:05 by flydream1314
[考研] 工科 22408 267求推荐 +4 wanwan00 2026-04-05 5/250 2026-04-06 22:47 by chenzhimin
[考研] 22408 总分320，一篇论文二作，两个国三，求调剂 +3 Leomulufu 2026-04-04 5/250 2026-04-05 19:04 by chongya
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-04-04 5/250 2026-04-05 14:06 by imissbao
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 可跨专业调剂 +3 周的得地 2026-04-04 6/300 2026-04-04 22:21 by barlinike
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 298求B区调剂 +4 zzz，，r 2026-04-02 5/250 2026-04-02 12:17 by 土木硕士招生
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭