应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 某基因在某些大麦品系很难扩出的原因
51/1返回列表
查看: 879  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看

hqc87

铁虫 (小有名气)

[求助] 某基因在某些大麦品系很难扩出的原因

设计了引物想扩大麦的一个转录因子基因，用的就是基因组DNA做模板来扩增，模板质量经检测没有问题，浓度调整到200ng/ul左右用于扩增的，此基因GC含量70%，加了DMSO还是轻易能扩出，问题是我有八个大麦品种，为什么两个品种条带很弱很弱，其他六个很亮很亮，重复几次还是这样，考虑到引物区在这两个品种中存在SNP的可能性，所以又设计了一对引物，结果扩增结果还是那两个品种很弱，有可能是这两个品系中该基因拷贝少么？还有其他原因么？请各位看官、大虾分析分析

[ Last edited by hqc87 on 2011-11-3 at 21:24 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物科学

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-03 21:22:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

hqc87(金币+1): 谢谢回复！ 2011-11-16 23:11:02
高GC含量的区域有时会这样的。你可以试试TAKARA的EX taq 配上 GC buffer。这套组合在我们实验室里用来扩高GC含量模板效果蛮好的
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
2楼2011-11-16 08:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqc87

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-16 08:47:12:
高GC含量的区域有时会这样的。你可以试试TAKARA的EX taq 配上 GC buffer。这套组合在我们实验室里用来扩高GC含量模板效果蛮好的

谢谢回复！我在扩增时也加了DMSO 问题是在模板DNA的质量保证都没问题的情况下，为什么6个大麦品种能扩出很强的带，而其他两个品种却很弱很弱？
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-16 23:09:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, BioEPI+1): 2011-11-17 12:25:15
hqc87(金币+4): 2011-11-18 05:14:11
引用回帖:
3楼: Originally posted by hqc87 at 2011-11-16 23:09:54:
谢谢回复！我在扩增时也加了DMSO 问题是在模板DNA的质量保证都没问题的情况下，为什么6个大麦品种能扩出很强的带，而其他两个品种却很弱很弱？

既然是不同品种，那片段序列就可能不同啊。
第一点：有时候高GC含量区域并不是简单的加DMSO就能解决的，DMSO的量也有讲究的，而一些复杂二级结构的区域也会造成扩增效果不好，商品化的buffer比你自己加DMSO要好一些，也不贵，就几十块钱而已。TAKARA的GCbuffer就有两种，可见这类buffer的最佳配方要根据情况而定呢。
第二点：既然是不同的品系，那么序列就会有差异，你确定你选择的引物互补序列是绝对保守的吗？？有没有可能那两个品系里引物互补序列发生变化导致不完美互补？？
赞一下(1人) 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-11-17 08:58:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hqc87

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by terry130 at 2011-11-17 08:58:07:
既然是不同品种，那片段序列就可能不同啊。
第一点：有时候高GC含量区域并不是简单的加DMSO就能解决的，DMSO的量也有讲究的，而一些复杂二级结构的区域也会造成扩增效果不好，商品化的buffer比你自己加DMSO要好 ...

这个我也考虑过引物结合序列存在SNP的可能性，所以重新设计了另一对引物，两对引物的结果都是这两个品种条带很弱，但条带大小和其他品种一样，明天试着把这两个品种的扩增产物做模板进行二次扩增，看能不能得到强的条带 然后克隆测序看看 到底怎么回事，谢谢给我思考这个问题 金币都送给你了 呵呵
赞一下 回复此楼
5楼2011-11-18 05:13:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hqc87 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:03 by zcl123
[考研] 0856调剂，是学校就去 +4 sllhht 2026-03-19 5/250 2026-03-19 17:45 by 星空星月
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 材料与化工求调剂 +7 为学666 2026-03-16 7/350 2026-03-19 14:48 by 尽舜尧1
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 317求调剂 +3 申子申申 2026-03-19 6/300 2026-03-19 14:16 by 申子申申
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +10 SUICHILD 2026-03-12 10/500 2026-03-19 09:51 by Delta2012
[考研] 354求调剂 +4 Tyoumou 2026-03-18 7/350 2026-03-18 21:45 by Tyoumou
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 311求调剂 +6 26研0 2026-03-15 6/300 2026-03-18 14:43 by haxia
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 招收0805（材料）调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] ［0860］321分求调剂，ab区皆可 +4 宝贵热 2026-03-13 4/200 2026-03-13 22:01 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭