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mYang88

新虫 (初入文坛)

[求助] 多个亚基蛋白 ORF串联表达

请问:4个亚基的蛋白  ,4个ORF可否串联在一起 构建一个重组子表达

如果可以,那么
(1)ORF之间是否需要添加其他序列
(2)4个ORF共用一个启动子会不会影响表达效率
(3)每个ORF都要保留有完整的其实种子密码子么
(4)构建重组子时应注意哪些问题

不胜感激!
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2, MolEPI+1): 鼓励积极应助! 2011-11-01 19:53:45
只做过2个ORF的。。。
(3)终止密码子只保留最后一个ORF的,前面3个的去掉,不然后面的没法翻译。
(4)最需要注意的就是阅读框,因为克隆过程中会引入多余的序列,所以设计时就必须考虑阅读框,避免密码突变。
做得不多,只能说这么点了,等高人吧。
3楼2011-11-01 17:16:17
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mYang88

新虫 (初入文坛)

纠正。。。。(3)每个ORF是否需要保留完整的终止密码子
2楼2011-11-01 10:36:51
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mYang88

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-11-01 17:16:17:
只做过2个ORF的。。。
(3)终止密码子只保留最后一个ORF的,前面3个的去掉,不然后面的没法翻译。
(4)最需要注意的就是阅读框,因为克隆过程中会引入多余的序列,所以设计时就必须考虑阅读框,避免密码突变。 ...

可是如果中间的终止密码子去掉翻译出来不就成了一条肽链么?
4楼2011-11-01 17:59:28
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-11-02 14:51:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by mYang88 at 2011-11-01 17:59:28:
可是如果中间的终止密码子去掉翻译出来不就成了一条肽链么?

每个蛋白都有自己的起始密码子,转录的时候得到一条mRNA,但是翻译时候还是能得到4个蛋白的吧。我经常做的是把GFP连在一个蛋白的后面,克隆的时候需要把前面这个蛋白的终止密码子去掉的。
不过你要4个蛋白一起,感觉有难度呢。
我做的不是很多,共同学习哈!
5楼2011-11-01 18:06:15
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