| 查看: 3547 | 回复: 10 | |||
| 本帖产生 1 个 APEPI ，点击这里进行查看 | |||
changer32捐助贵宾 (小有名气)
|
[交流]
TCA/丙酮法提取植物蛋白 已有6人参与
|
||
|
我用TCA/丙酮法提取植物蛋白，得到的蛋白在缓冲液中溶解性很差，呈胶质状，请问高手，这样的现象正常吗？ 另外更糟糕的是提到的蛋白做SDS-PAGE跑不出条带，想请教问题出在哪里？针对我的实验材料，TCA/丙酮法可行吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
江苏省优青门槛
已经有20人回复
-
心好累。今年我们部门提交了18个项目。中了11了，可惜我的又挂了
已经有10人回复
-
植物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有99人回复
-
面上项目计划书
已经有7人回复
-
面上项目计划书附件
已经有9人回复
-
面上项目计划书系统状态
已经有18人回复
-
NSFC-UNEP（与联合国环境规划署）合作项目
已经有33人回复
-
和伊朗人合作
已经有32人回复
-
江苏省自然基金
已经有7人回复
-
生命科学新英文普刊《INVESTIGATION OF LIFE SCIENCE》
已经有8人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求适合western bloting的提取植物组织蛋白提取方法
已经有12人回复
- TCA/丙酮沉淀法提取牛肌肉总蛋白，总是缺失大分量蛋白的原因在哪呢？
已经有5人回复
- 超声波清洗仪可以用来裂解蛋白（丙酮沉淀离心后的）助溶吗？？会降解蛋白吗？
已经有10人回复
- TCA/丙酮沉淀，蛋白为什么不溶呢？？
已经有14人回复
- 【资料】植物总蛋白提取方法
已经有80人回复
- 双向，TCA丙酮沉淀提取的蛋白，裂解液是不是水化液一样啊 ？
已经有6人回复
- 双向电泳，TCA丙酮沉淀体总蛋白，干燥多久，溶解多久啊 ？
已经有5人回复
- 【求助】植物蛋白质提取纯化方法
已经有12人回复
qiugaoxiang
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 55.1
- 散金: 152
- 红花: 2
- 帖子: 228
- 在线: 278.5小时
- 虫号: 988931
- 注册: 2010-04-04
- 专业: 药物分析
2楼2011-10-28 10:44:10
wangjetby
木虫 (小有名气)
- 应助: 8 (幼儿园)
- 金币: 2497.9
- 散金: 100
- 红花: 1
- 帖子: 112
- 在线: 247.9小时
- 虫号: 832918
- 注册: 2009-08-23
- 性别: GG
- 专业: 植物化学保护
3楼2011-10-28 11:25:08
changer32
捐助贵宾 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1215.1
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 137
- 在线: 47.4小时
- 虫号: 488614
- 注册: 2007-12-30
- 专业: 天然药物化学
★ ★
jhu132llh(金币+2): 鼓励交流 2011-10-28 17:08:59
jhu132llh(金币+2): 鼓励交流 2011-10-28 17:08:59
|
提取步骤参照文献 biotechnol.&biotechnol.EQ.24/2010/4 10g叶片，液氮磨成细粉，加20ml预冷的10%TCA-丙酮，充分混匀，-20℃放90min,4℃、11000rpm(约12000g)离心15min, 弃上清。 沉淀用20ml冷丙酮洗2次。 将沉淀在室温空气中晾干。 晾干后的沉淀加 6ml TLB缓冲液（8M Urea, 2M thiourea, 4%(w/v)CHAP, 0.4%(v/v)carrier ampho, 50mM DTT），充分混匀后保持5min. 提取物离心(11000rpm,15min,4℃),取上清液。 上清液加入4倍含10%（v/v)TCA的冷丙酮（其中含20mMDTT），在-20℃保持90min，混合物离心(11000rpm,15min,4℃),取沉淀。 沉淀用含20mMDTT的冷丙酮洗涤2次，沉淀风干后加TLB缓冲液溶解，得蛋白。 ----------------------------------------------------------------------------------- 得到的蛋白在TLB缓冲液中溶解性很差，SDS-PAGE也跑不出条带。 ---------------------------------------------------------------- 文献中的离心条件是16000g, 但我的离心机只能达到12000g。是不是离心力不够呢？ -------------------------------------------------- 多谢高手指点！ |
4楼2011-10-28 12:38:00
guxinhan123
银虫 (正式写手)
- 应助: 60 (初中生)
- 金币: 361.8
- 红花: 5
- 帖子: 322
- 在线: 179.7小时
- 虫号: 526470
- 注册: 2008-03-16
- 专业: 中药资源
5楼2011-10-28 17:03:20
guxinhan123
银虫 (正式写手)
- 应助: 60 (初中生)
- 金币: 361.8
- 红花: 5
- 帖子: 322
- 在线: 179.7小时
- 虫号: 526470
- 注册: 2008-03-16
- 专业: 中药资源
6楼2011-10-28 17:03:59
changer32
捐助贵宾 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1215.1
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 137
- 在线: 47.4小时
- 虫号: 488614
- 注册: 2007-12-30
- 专业: 天然药物化学
7楼2011-10-28 21:51:07
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jhu132llh(金币+3, APEPI+1): good,感谢积极应助,很专业 2011-10-30 18:15:46
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jhu132llh(金币+3, APEPI+1): good,感谢积极应助,很专业 2011-10-30 18:15:46
|
看看这个nature protocol Sample extraction techniques for enhanced proteomic analysis of plant tissues 我前几个星期，刚用这个protocol作的，还可以，你是要做2-D 吧。 主要是丙酮挥干这一步，不要太干，太干很难。 用超声可能能帮助溶解 步骤是这样的，和你的差不多，但少几步： （1）Place frozen plant tissue into the cold mortar. Add acid-washed sand (0.5–5 g per 1 g fresh tissue; optional) and PVPP (1–15% (wt/wt); optional) and grind tissue into a fine powder using the pestle and mortar （2）Suspend the powder in TCA extraction buffer (5-15 ml solution per gram tissue). Store at –20 1C overnight. Proteins should precipitate as white flakes （3）Centrifuge the sample for 30 min at 5,000g at 4 1C. Carefully pipette out the supernatant and discard. （4）Add 10 ml ice-cold acetone to the pellet and centrifuge the sample for 10 min at 5,000g at 4 1C. Carefully remove the supernatant with a pipette and discard. （5）Repeat Step （4）two more times （6）Resuspend the pellet in a buffer for protein resuspension that is appropriate for the downstream analytical approach. Notes： Protein resolubilization is often one of the most challenging steps of the procedure. It may be necessary to increase the amount of buffer added to resuspend the pellet fully, and in some cases there may always be a residual pellet. Pellets can be resuspended in a microcentrifuge tube with a mini-magnetic stirrer. Sonication can also be used to help resuspend the pellet, but care should be taken not to heat the sample, so it is recommended that the sample be sonicated in short bursts while dipping the tube in ice water. |
8楼2011-10-30 00:15:04
changer32
捐助贵宾 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1215.1
- 散金: 15
- 红花: 1
- 帖子: 137
- 在线: 47.4小时
- 虫号: 488614
- 注册: 2007-12-30
- 专业: 天然药物化学
9楼2011-10-31 16:00:10
10楼2012-06-29 08:18:33
