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changer32捐助贵宾 (小有名气)
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TCA/丙酮法提取植物蛋白 已有6人参与
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我用TCA/丙酮法提取植物蛋白，得到的蛋白在缓冲液中溶解性很差，呈胶质状，请问高手，这样的现象正常吗？ 另外更糟糕的是提到的蛋白做SDS-PAGE跑不出条带，想请教问题出在哪里？针对我的实验材料，TCA/丙酮法可行吗？ |
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guxinhan123
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5楼2011-10-28 17:03:20
wangjetby
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jhu132llh(金币+2): 鼓励交流 2011-10-28 17:08:59
jhu132llh(金币+2): 鼓励交流 2011-10-28 17:08:59
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提取步骤参照文献 biotechnol.&biotechnol.EQ.24/2010/4 10g叶片，液氮磨成细粉，加20ml预冷的10%TCA-丙酮，充分混匀，-20℃放90min,4℃、11000rpm(约12000g)离心15min, 弃上清。 沉淀用20ml冷丙酮洗2次。 将沉淀在室温空气中晾干。 晾干后的沉淀加 6ml TLB缓冲液（8M Urea, 2M thiourea, 4%(w/v)CHAP, 0.4%(v/v)carrier ampho, 50mM DTT），充分混匀后保持5min. 提取物离心(11000rpm,15min,4℃),取上清液。 上清液加入4倍含10%（v/v)TCA的冷丙酮（其中含20mMDTT），在-20℃保持90min，混合物离心(11000rpm,15min,4℃),取沉淀。 沉淀用含20mMDTT的冷丙酮洗涤2次，沉淀风干后加TLB缓冲液溶解，得蛋白。 ----------------------------------------------------------------------------------- 得到的蛋白在TLB缓冲液中溶解性很差，SDS-PAGE也跑不出条带。 ---------------------------------------------------------------- 文献中的离心条件是16000g, 但我的离心机只能达到12000g。是不是离心力不够呢？ -------------------------------------------------- 多谢高手指点！ |
4楼2011-10-28 12:38:00
guxinhan123
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6楼2011-10-28 17:03:59
