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纤维素酶国标测定方法中的疑问,求指教
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在国标饲用《纤维素酶活性的测定 滤纸法》中,先加酶液和先加DNS有什么区别?在A0的测定中,先加DNS,接着加酶液,会导致酶不起作用吗?还有为什么采用(A1-A0)确定糖含量,而不直接以A0作为空白直接测定A1?有区别吗?谢谢指教: 8.3.2 在25 mL具塞比色管中加入滤纸条(5.8)--滤纸条须对衬剪成32片并全部放入,加1.0 mL柠檬酸盐缓冲液(5.7)浸润滤纸片,37℃水浴平衡10 min,再依次加入2.00 mL DNS试剂(5.9),0.50 mL酶液(8.3.1),5 mL水,电磁振荡3 s-5 s,37℃水浴中保温60 min(用秒表控制),然后再沸水浴中煮沸5 min,冷却至室温,用水定容至25 mL,在540 nm波长处测定校准值A0。 8.3.3 在25 mL具塞比色管中加入滤纸条(5.8)--滤纸条须对衬剪成32片并全部放入,加1.0 mL柠檬酸盐缓冲液(5.7)浸润滤纸片,37℃水浴平衡10 min,再依次加入0.50 mL酶液(8.3.1),5 mL水,电磁振荡3 s-5 s,37℃水浴中保温60 min(用秒表控制),加2.00 mL DNS试剂(5.9),然后再沸水浴中煮沸5 min,冷却至室温,用水定容至25 mL,在540 nm波长处测定吸光度A1。 |
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