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小崔9333

木虫 (正式写手)

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[交流] 纤维素酶国标测定方法中的疑问，求指教

在国标饲用《纤维素酶活性的测定滤纸法》中，先加酶液和先加DNS有什么区别？在A0的测定中，先加DNS，接着加酶液，会导致酶不起作用吗？还有为什么采用（A1-A0）确定糖含量，而不直接以A0作为空白直接测定A1？有区别吗？谢谢指教：
8.3.2 在25 mL具塞比色管中加入滤纸条（5.8）--滤纸条须对衬剪成32片并全部放入，加1.0 mL柠檬酸盐缓冲液（5.7）浸润滤纸片，37℃水浴平衡10 min，再依次加入2.00 mL DNS试剂（5.9），0.50 mL酶液（8.3.1），5 mL水，电磁振荡3 s-5 s，37℃水浴中保温60 min（用秒表控制），然后再沸水浴中煮沸5 min，冷却至室温，用水定容至25 mL，在540 nm波长处测定校准值A0。
8.3.3 在25 mL具塞比色管中加入滤纸条（5.8）--滤纸条须对衬剪成32片并全部放入，加1.0 mL柠檬酸盐缓冲液（5.7）浸润滤纸片，37℃水浴平衡10 min，再依次加入0.50 mL酶液（8.3.1），5 mL水，电磁振荡3 s-5 s，37℃水浴中保温60 min（用秒表控制），加2.00 mL DNS试剂（5.9），然后再沸水浴中煮沸5 min，冷却至室温，用水定容至25 mL，在540 nm波长处测定吸光度A1。

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1楼 2011-10-12 18:04:18

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yangxulssw106

捐助贵宾 (正式写手)

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★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-07-17 10:45:17

DNS中有大量氢氧化钠，会导致酶失活。空白对照先加DNS，后加酶是对的。

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