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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB实验，胶片问题
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晴天1882

木虫 (正式写手)

[求助] WB实验，胶片问题

1：之前的实验还是比较顺利，直到加完ECL后，能见到荧光，而且还比较强，但是为什么用胶片压得时候总是无法弄到胶片上，后面显影肯定就没用了，胶片也换过了，内参和我的目的蛋白都是这种情况，而且也做了很多次情况也是一样。
2：电泳的时候有时候条带会偏，跑出来不是直线。这又是怎么回事？
想问下大家这是怎么回事？
急急急急急急急……
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人有绝交，才有至交！
1楼 2011-10-10 10:25:31
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爱学习的孩子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助！ 2011-10-10 15:17:11
1、首先确定你的样品中有目的蛋白条带，这点估计你应该确定过了的；然后应该是是转膜的时间、电压不合适，要么过了，要么不够，在这方面作以适当调整
2、条带跑偏的问题。尽量避免使用靠边的泳道；制胶尽量做到均匀；用低电压跑胶
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为了生活中的目标而奋斗
2楼2011-10-10 12:54:49
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晴天1882

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱学习的孩子 at 2011-10-10 12:54:49:
1、首先确定你的样品中有目的蛋白条带，这点估计你应该确定过了的；然后应该是是转膜的时间、电压不合适，要么过了，要么不够，在这方面作以适当调整
2、条带跑偏的问题。尽量避免使用靠边的泳道；制胶尽量做到均 ...

因为ECL过后能看见荧光，应该电泳和转膜没问题，actin也是同样的情况，就是用胶片压不上去，不知道是什么原因？
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人有绝交，才有至交！
3楼2011-10-10 14:35:14
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-10 18:38:35
晴天1882(金币+1): 谢谢 2011-10-12 08:59:22
显影液定影液换换试试，还有你是不是用的洗片机进行洗膜的？
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4楼2011-10-10 15:29:50
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ha2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): good 2011-10-10 18:38:44
晴天1882(金币+1): 谢谢 2011-10-12 08:59:08
换显影液你要确定X线片没问题只有显影液的问题了
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5楼2011-10-10 16:08:19
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晴天1882

木虫 (正式写手)
西瓜: 有没有压到片上，都需要显影才能看出来呀。建议换显影液。 2011-10-10 18:39:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by ha2007 at 2011-10-10 16:08:19:
换显影液你要确定X线片没问题只有显影液的问题了

胶片换了，还是没有用，都压不倒胶片上，显影肯定也没有啊！
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6楼2011-10-10 16:16:04
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mn--steel

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

晴天1882(金币+3): 谢谢，原来是这么简单的问题 2011-10-12 08:58:36
你的问题很简单，见到光压不上，如果胶片也没问题，必然是显影液定影液的问题，重新配吧。配显影液的注意，显影粉里边有一个小袋子和一个大袋子，先溶解小袋，再放大袋子里的，特别要注意小袋子里的东西是一定要加进去的，要不然显影是没有作用的，出来透明白板一个。
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7楼2011-10-11 09:31:11
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wtery

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了，还是没有用，都压不倒胶片上，显影肯定也没有啊！...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上，是要用显影液显影才能看到的
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8楼2012-06-08 15:54:43
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wtery

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了，还是没有用，都压不倒胶片上，显影肯定也没有啊！...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上，是要用显影液显影才能看到的
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9楼2012-06-08 15:54:52
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wtery

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了，还是没有用，都压不倒胶片上，显影肯定也没有啊！...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上，是要用显影液显影才能看到的
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10楼2012-06-08 15:55:07
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