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晴天1882

木虫 (正式写手)

[求助] WB实验,胶片问题

1:之前的实验还是比较顺利,直到加完ECL后,能见到荧光,而且还比较强,但是为什么用胶片压得时候总是无法弄到胶片上,后面显影肯定就没用了,胶片也换过了,内参和我的目的蛋白都是这种情况,而且也做了很多次情况也是一样。
2:电泳的时候有时候条带会偏,跑出来不是直线。这又是怎么回事?
想问下大家这是怎么回事?
急急急急急急急……
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爱学习的孩子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
wanhscn(金币+2): 鼓励应助! 2011-10-10 15:17:11
1、首先确定你的样品中有目的蛋白条带,这点估计你应该确定过了的;然后应该是是转膜的时间、电压不合适,要么过了,要么不够,在这方面作以适当调整
2、条带跑偏的问题。尽量避免使用靠边的泳道;制胶尽量做到均匀;用低电压跑胶
为了生活中的目标而奋斗
2楼2011-10-10 12:54:49
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晴天1882

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱学习的孩子 at 2011-10-10 12:54:49:
1、首先确定你的样品中有目的蛋白条带,这点估计你应该确定过了的;然后应该是是转膜的时间、电压不合适,要么过了,要么不够,在这方面作以适当调整
2、条带跑偏的问题。尽量避免使用靠边的泳道;制胶尽量做到均 ...

因为ECL过后能看见荧光,应该电泳和转膜没问题,actin也是同样的情况,就是用胶片压不上去,不知道是什么原因?
人有绝交,才有至交!
3楼2011-10-10 14:35:14
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arniekyo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-10-10 18:38:35
晴天1882(金币+1): 谢谢 2011-10-12 08:59:22
显影液定影液换换试试,还有你是不是用的洗片机进行洗膜的?
4楼2011-10-10 15:29:50
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ha2007

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): good 2011-10-10 18:38:44
晴天1882(金币+1): 谢谢 2011-10-12 08:59:08
换显影液你要确定X线片没问题只有显影液的问题了
5楼2011-10-10 16:08:19
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晴天1882

木虫 (正式写手)

西瓜: 有没有压到片上,都需要显影才能看出来呀。建议换显影液。 2011-10-10 18:39:54
引用回帖:
5楼: Originally posted by ha2007 at 2011-10-10 16:08:19:
换显影液你要确定X线片没问题只有显影液的问题了

胶片换了,还是没有用,都压不倒胶片上,显影肯定也没有啊!
人有绝交,才有至交!
6楼2011-10-10 16:16:04
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mn--steel

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

晴天1882(金币+3): 谢谢,原来是这么简单的问题 2011-10-12 08:58:36
你的问题很简单,见到光压不上,如果胶片也没问题,必然是显影液定影液的问题,重新配吧。配显影液的注意,显影粉里边有一个小袋子和一个大袋子,先溶解小袋,再放大袋子里的,特别要注意小袋子里的东西是一定要加进去的,要不然显影是没有作用的,出来透明白板一个。
7楼2011-10-11 09:31:11
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wtery

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了,还是没有用,都压不倒胶片上,显影肯定也没有啊!...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上,是要用显影液显影才能看到的
8楼2012-06-08 15:54:43
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wtery

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了,还是没有用,都压不倒胶片上,显影肯定也没有啊!...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上,是要用显影液显影才能看到的
9楼2012-06-08 15:54:52
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wtery

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2353949楼: Originally posted by 晴天1882 at 2011-10-10 16:16:04
胶片换了,还是没有用,都压不倒胶片上,显影肯定也没有啊!...

ECL显影不是说直接将荧光压倒片子上,是要用显影液显影才能看到的
10楼2012-06-08 15:55:07
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