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cpumxl

金虫 (小有名气)

[求助] 关于T7-Tag? 已有1人参与

我最近在用pET28a做构建表达蛋白,采用N段的His-Tag进行后面的纯化,而选用的酶切位点是BamH1和Xhol1(后面带了终止密码子),因为用的是BamH1酶切位点,而没有采用前面的Nde1进行酶切,会导致表达产物会带上T7-Tag,不知道这样做影响大不大,我该怎么办,望指点,谢谢!
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doublehelix

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


西瓜(金币+1): 有经验! 2011-10-10 17:19:07
cpumxl(金币+2): 我想拿这个蛋白做抗原,制备单抗,不知道影响会怎么? 2011-10-10 23:02:13
影响一般不大..这也与你所表达的蛋白有关,国外很多都这样做 ,我们实验室也是如此。如果实在不放心,那就重设一下上游引物吧
2楼2011-10-09 13:31:50
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

没什么影响,直接做就好了
在等待中涅槃重生
3楼2011-10-09 13:33:08
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

应该没啥事,直接做就是了……
显微镜下的世界很精彩!
4楼2011-10-09 13:34:06
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wxy1989714

木虫 (正式写手)

楼主我和你做的很一致啊,可能就目的基因不同吧,不过我还没开始酶切,有机会跟你交流一下~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
树叶飞舞,火之意志。
5楼2011-10-09 14:05:53
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

cpumxl(金币+2): 我想拿这个蛋白做抗原,制备单抗,不知道影响会怎么? 2011-10-10 23:03:05
应该没事,我们经常这样做的,但关键看你的蛋白,如果不行就要从新设计引物了
我选择,我喜欢;我喜欢我的选择。
6楼2011-10-09 19:21:26
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姣妹崽

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

求问各位前辈,T7·Tag是什么作用?我设计引物时把它切掉了影响大吗
7楼2014-07-09 15:58:03
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阡陌云扬

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 姣妹崽 at 2014-07-09 15:58:03
求问各位前辈,T7·Tag是什么作用?我设计引物时把它切掉了影响大吗

我也想知道
8楼2015-06-16 21:46:28
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whqishinee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 阡陌云扬 at 2015-06-16 21:46:28
我也想知道...

我也想知道!
9楼2016-01-05 14:47:42
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