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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 流式收集细胞时是否保留废液再进行消化————请战友们回答，谢谢!
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2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] 流式收集细胞时是否保留废液再进行消化————请战友们回答，谢谢! 已有3人参与

最近在做流式检测细胞周期，想请教战友们：流式收集细胞时是否需要先保留

培养基废液（含有一些受药物影响后，不贴壁且细胞形态已改变的细胞），然后再

对贴壁细胞进行消化，以保证实验结果的准确？？？望各位多多指教，谢谢！
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1楼 2011-10-08 17:21:49
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-10-09 07:56:26
若是结果漂亮的话，还是弃去的好，毕竟这些变形的细胞会形成一个细胞群，也会给划门带来不便。毕竟流式是分析单个细胞的，最终结果是所划门为准。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2011-10-08 23:09:12
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by l-c-l at 2011-10-08 23:09:12:
若是结果漂亮的话，还是弃去的好，毕竟这些变形的细胞会形成一个细胞群，也会给划门带来不便。毕竟流式是分析单个细胞的，最终结果是所划门为准。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

谢谢这位战友的热心回答。想再问一下，在70%乙醇固定前，细胞经多步离心后，已经粘连成团，絮状，很难吹打散开，请问你是否遇到类似情况，怎样处理较为妥当？我之前吹打很久才能破坏细胞的粘连，总觉得该做法对细胞产生较大的机械性损伤。
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3楼2011-10-11 15:11:49
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l-c-l

金虫 (正式写手)
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
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3楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 15:11:49:
谢谢这位战友的热心回答。想再问一下，在70%乙醇固定前，细胞经多步离心后，已经粘连成团，絮状，很难吹打散开，请问你是否遇到类似情况，怎样处理较为妥当？我之前吹打很久才能破坏细胞的粘连，总觉得该做法对细 ...

一般情况下，做周期，若细胞出现团块且吹打不开，说明这些团块细胞已经不能用于检测（死亡），团块细胞往往是碎片或形态已改变，已经谈不上周期检测了；我们出现这些情况一般是采用过滤的方法处理。
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4楼2011-10-11 17:03:32
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by l-c-l at 2011-10-11 17:03:32:
一般情况下，做周期，若细胞出现团块且吹打不开，说明这些团块细胞已经不能用于检测（死亡），团块细胞往往是碎片或形态已改变，已经谈不上周期检测了；我们出现这些情况一般是采用过滤的方法处理。

恩，请问用什么来过滤细胞悬液，是0.22um滤膜吗？该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目？还有疑问，你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不？是种一块6孔板还是为了增加复孔，从而种两块6孔板？非常谢谢你的耐心。
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5楼2011-10-11 21:23:03
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l-c-l

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 21:23:03:
恩，请问用什么来过滤细胞悬液，是0.22um滤膜吗？该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目？还有疑问，你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不？是种一块6孔板还是为了增加复孔，从而种两块6孔板？非常谢谢你 ...

尼龙膜即可，建议购买周期检测试剂盒，BD公司的不错
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6楼2011-10-12 13:41:40
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mokou85

金虫 (小有名气)
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楼主你好，我最近也要做这方面的试验，可是我从没做过，可否把你的简略步骤讲一下呢，或者相关资料可以发给我一下吗？ 非常感谢！
我的邮箱jiangxue_85@sina.com
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7楼2011-10-17 11:43:40
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2011加油

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mokou85 at 2011-10-17 11:43:40:
楼主你好，我最近也要做这方面的试验，可是我从没做过，可否把你的简略步骤讲一下呢，或者相关资料可以发给我一下吗？ 非常感谢！
我的邮箱jiangxue_85@sina.com

已发，查收邮件吧。
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8楼2011-10-18 18:38:24
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蛋白小王子6

银虫 (小有名气)
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2414739楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 21:23:03
恩，请问用什么来过滤细胞悬液，是0.22um滤膜吗？该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目？还有疑问，你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不？是种一块6孔板还是为了增加复孔，从而种两块6孔板？非常谢谢你的 ...

2011你好  不知道你最近是否能上线，我最近也打算做流式细胞仪单染，遇到了和你一样的问题就是细胞的数目，你现在是种的6孔板，然后一孔板做一个样行吗？  谢谢
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读书也不必只读纸做的书，山水可以读，云雨可以读，官场可以读，商界可以读，赌徒和妓女也是书，只在家读书，读了书还是书，无异于整日喝酒、打牌和吸烟土。
9楼2012-09-03 16:21:33
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2011加油

银虫 (正式写手)
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4673362楼: Originally posted by 蛋白小王子6 at 2012-09-03 16:21:33
2011你好  不知道你最近是否能上线，我最近也打算做流式细胞仪单染，遇到了和你一样的问题就是细胞的数目，你现在是种的6孔板，然后一孔板做一个样行吗？  谢谢...

用6孔板做实验，要保证细胞数目在10的6次方这样较好，有时高剂量的给药组对细胞的杀伤能力较强，若扔掉培养基再收集细胞的话，有可能造成该组的细胞数目不够，可以针对高剂量组做一个复孔，其余各组可以不做。或者每组均做复孔，相当于做两块6孔板，最后将各组细胞收集到一块，这时每孔的细胞数可以少一些，在5乘以10的5次方这样。祝实验顺利。
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每天都是新开始，2011，要好好努力！
10楼2012-09-04 10:21:52
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