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2011加油

银虫 (正式写手)

[交流] 流式收集细胞时是否保留废液再进行消化————请战友们回答,谢谢! 已有3人参与

最近在做流式检测细胞周期,想请教战友们:流式收集细胞时是否需要先保留

培养基废液(含有一些受药物影响后,不贴壁且细胞形态已改变的细胞),然后再

对贴壁细胞进行消化,以保证实验结果的准确???望各位多多指教,谢谢!
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l-c-l

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-10-09 07:56:26
若是结果漂亮的话,还是弃去的好,毕竟这些变形的细胞会形成一个细胞群,也会给划门带来不便。毕竟流式是分析单个细胞的,最终结果是所划门为准。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2011-10-08 23:09:12
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2011加油

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by l-c-l at 2011-10-08 23:09:12:
若是结果漂亮的话,还是弃去的好,毕竟这些变形的细胞会形成一个细胞群,也会给划门带来不便。毕竟流式是分析单个细胞的,最终结果是所划门为准。
[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]

谢谢这位战友的热心回答。想再问一下,在70%乙醇固定前,细胞经多步离心后,已经粘连成团,絮状,很难吹打散开,请问你是否遇到类似情况,怎样处理较为妥当?我之前吹打很久才能破坏细胞的粘连,总觉得该做法对细胞产生较大的机械性损伤。
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3楼2011-10-11 15:11:49
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l-c-l

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 15:11:49:
谢谢这位战友的热心回答。想再问一下,在70%乙醇固定前,细胞经多步离心后,已经粘连成团,絮状,很难吹打散开,请问你是否遇到类似情况,怎样处理较为妥当?我之前吹打很久才能破坏细胞的粘连,总觉得该做法对细 ...

一般情况下,做周期,若细胞出现团块且吹打不开,说明这些团块细胞已经不能用于检测(死亡),团块细胞往往是碎片或形态已改变,已经谈不上周期检测了;我们出现这些情况一般是采用过滤的方法处理。
4楼2011-10-11 17:03:32
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2011加油

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by l-c-l at 2011-10-11 17:03:32:
一般情况下,做周期,若细胞出现团块且吹打不开,说明这些团块细胞已经不能用于检测(死亡),团块细胞往往是碎片或形态已改变,已经谈不上周期检测了;我们出现这些情况一般是采用过滤的方法处理。

恩,请问用什么来过滤细胞悬液,是0.22um滤膜吗?该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目?还有疑问,你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不?是种一块6孔板还是为了增加复孔,从而种两块6孔板?非常谢谢你的耐心。
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5楼2011-10-11 21:23:03
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l-c-l

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 21:23:03:
恩,请问用什么来过滤细胞悬液,是0.22um滤膜吗?该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目?还有疑问,你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不?是种一块6孔板还是为了增加复孔,从而种两块6孔板?非常谢谢你 ...

尼龙膜即可,建议购买周期检测试剂盒,BD公司的不错
6楼2011-10-12 13:41:40
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mokou85

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
楼主你好,我最近也要做这方面的试验,可是我从没做过,可否把你的简略步骤讲一下呢,或者相关资料可以发给我一下吗? 非常感谢!
我的邮箱jiangxue_85@sina.com
7楼2011-10-17 11:43:40
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2011加油

银虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by mokou85 at 2011-10-17 11:43:40:
楼主你好,我最近也要做这方面的试验,可是我从没做过,可否把你的简略步骤讲一下呢,或者相关资料可以发给我一下吗? 非常感谢!
我的邮箱jiangxue_85@sina.com

已发,查收邮件吧。
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8楼2011-10-18 18:38:24
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蛋白小王子6

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2414739楼: Originally posted by 2011加油 at 2011-10-11 21:23:03
恩,请问用什么来过滤细胞悬液,是0.22um滤膜吗?该做法是否会减少上流式细胞仪的细胞数目?还有疑问,你做周期实验的细胞密度是1乘以10的6次方不?是种一块6孔板还是为了增加复孔,从而种两块6孔板?非常谢谢你的 ...

2011你好  不知道你最近是否能上线,我最近也打算做流式细胞仪单染,遇到了和你一样的问题就是细胞的数目,你现在是种的6孔板,然后一孔板做一个样行吗?  谢谢
读书也不必只读纸做的书,山水可以读,云雨可以读,官场可以读,商界可以读,赌徒和妓女也是书,只在家读书,读了书还是书,无异于整日喝酒、打牌和吸烟土。
9楼2012-09-03 16:21:33
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2011加油

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4673362楼: Originally posted by 蛋白小王子6 at 2012-09-03 16:21:33
2011你好  不知道你最近是否能上线,我最近也打算做流式细胞仪单染,遇到了和你一样的问题就是细胞的数目,你现在是种的6孔板,然后一孔板做一个样行吗?  谢谢...

用6孔板做实验,要保证细胞数目在10的6次方这样较好,有时高剂量的给药组对细胞的杀伤能力较强,若扔掉培养基再收集细胞的话,有可能造成该组的细胞数目不够,可以针对高剂量组做一个复孔,其余各组可以不做。或者每组均做复孔,相当于做两块6孔板,最后将各组细胞收集到一块,这时每孔的细胞数可以少一些,在5乘以10的5次方这样。祝实验顺利。
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10楼2012-09-04 10:21:52
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