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huzhihong-

新虫 (小有名气)


[交流] PCR电泳,加样孔很亮,但目的条带却很淡,不知道怎么回事? 已有18人参与

如题,以胶回收产物为模板,进行第二轮PCR,做了三次,每次都是点样孔很亮,目的条带很淡,不知道为什么?请高手赐教!
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huzhihong-

新虫 (小有名气)


送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by chenguestc at 2011-10-03 09:35:30:
你的MARKER是对的,说明胶的问题不是很大(但也可能是影响因素)。
可能的原因是:(1)DNA不纯,里面蛋白质过多。
              (2)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
              (3)胶的浓度(过大或 ...

会不会是产物浓度过高呢?
7楼2011-10-03 17:00:02
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yanglie

木虫 (著名写手)

★ ★
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adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:51:56
浓度过高的可能性大
8楼2011-10-05 08:26:19
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yanglie

木虫 (著名写手)

DNA模板浓度过高
9楼2011-10-05 08:26:46
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普通回帖

粥香可爱

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
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adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:51:32
切胶的时候没有切到别的条带吗?有没有阴性对照,可能PCR体系有污染
莫负家国与红颜
2楼2011-10-02 22:44:23
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粥香可爱

铜虫 (正式写手)


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胶回收的产物没有超螺旋吗?亮的带在后面,会不会是超螺旋的质粒跑不动?
莫负家国与红颜
3楼2011-10-02 23:01:38
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chenguestc

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
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adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:51:40
你的MARKER是对的,说明胶的问题不是很大(但也可能是影响因素)。
可能的原因是:(1)DNA不纯,里面蛋白质过多。
              (2)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
              (3)胶的浓度(过大或过小)不适合你的PCR产物

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2011-10-03 09:35:30
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huzhihong-

新虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 粥香可爱 at 2011-10-02 22:44:23:
切胶的时候没有切到别的条带吗?有没有阴性对照,可能PCR体系有污染

这个没有,切胶的条带很单一的!
5楼2011-10-03 16:56:46
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huzhihong-

新虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by 粥香可爱 at 2011-10-02 23:01:38:
胶回收的产物没有超螺旋吗?亮的带在后面,会不会是超螺旋的质粒跑不动?

胶回收产物才1300kb,应该没有超螺旋吧
6楼2011-10-03 16:58:03
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niuniu111

木虫 (正式写手)


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不太懂,但需要关注啊
10楼2011-10-05 08:59:15
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