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xiaoyuan622

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我也遇到过好几次,换块胶重新跑一次就好了,至今不明白为什么。关注中。
11楼2011-10-05 09:45:59
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koojames23

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by huzhihong- at 2011-10-03 16:58:03:
胶回收产物才1300kb,应该没有超螺旋吧

1300kb?这么大?
还是1300bp?
如果是1300kb,那肯定是你胶回收的产物太浓了
红魔
12楼2011-10-05 10:16:00
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:52:25
1)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
2)胶回收产物作为模板加入量过多
3)PCR体系中酶量过多
转向地质微生物学
13楼2011-10-05 11:17:49
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zhgqn

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:52:35
不一定是模板浓度高,可能是上样样品浓度高,或者产物有蛋白污染。建议降低pcr产物上样量,排除上样样品浓度高的问题;做个有模板没有引物的pcr阴性对照,排除蛋白污染的问题。
chan
14楼2011-10-05 13:02:56
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youngker918

金虫 (正式写手)


adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:52:44
上样量太大,或是PCR循环过大了。看图你应该是跑了胶再放EB染色的吧,把EB加胶里就可以很多程度上减轻了
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
15楼2011-10-05 20:09:40
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粥香可爱

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
浓度太高也不可能这样啊,可能梳子不干净(排除超螺旋的情况),最好能重新跑
莫负家国与红颜
16楼2011-10-06 11:25:57
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moqiyilei

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:52:57
1应该是你PCR体系有污染,换一瓶新灭菌的双蒸水试试;
2将你的梳子用灭菌双蒸水彻底清洗干净,然后再做胶。
17楼2011-10-07 08:33:48
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lys6827

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:53:06
引用回帖:
13楼: Originally posted by liujianmin68 at 2011-10-05 11:17:49:
1)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
2)胶回收产物作为模板加入量过多
3)PCR体系中酶量过多

我觉得第一和第三点有点道理,我在做实验室的时候也遇到很多次这种问题。

从胶图上看,此次PCR反应也不是很好,有很长的弥散带,引物和模板的匹配还是有问题的,可以从源头上着手改进引物的匹配度和模板的质量。
18楼2011-10-07 09:55:47
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adslye

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
既然有目的条带,直接切下测序就行了呀。管杂带干吗?
19楼2011-10-07 13:53:39
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angusqing

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
分子量太大或者说蛋白质的问题吧,感觉根本没跑开
木秀于林而风必摧之
20楼2011-10-07 18:36:05
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