PCR电泳，加样孔很亮，但目的条带却很淡，不知道怎么回事？ - 生物科学

11楼2011-10-05 09:45:59

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koojames23

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6楼: Originally posted by huzhihong- at 2011-10-03 16:58:03:
胶回收产物才1300kb，应该没有超螺旋吧

1300kb？这么大？
还是1300bp？
如果是1300kb，那肯定是你胶回收的产物太浓了

红魔

12楼2011-10-05 10:16:00

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liujianmin68

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1)梳子非常不干净，有杂质在点样孔里
2)胶回收产物作为模板加入量过多
3)PCR体系中酶量过多

转向地质微生物学

13楼2011-10-05 11:17:49

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zhgqn

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不一定是模板浓度高，可能是上样样品浓度高，或者产物有蛋白污染。建议降低pcr产物上样量，排除上样样品浓度高的问题；做个有模板没有引物的pcr阴性对照，排除蛋白污染的问题。

chan

14楼2011-10-05 13:02:56

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youngker918

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上样量太大，或是PCR循环过大了。看图你应该是跑了胶再放EB染色的吧，把EB加胶里就可以很多程度上减轻了

天才就怕不够天才，坏又不够坏，天天都想离开，却不知何处才能换骨脱胎

15楼2011-10-05 20:09:40

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粥香可爱

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浓度太高也不可能这样啊，可能梳子不干净（排除超螺旋的情况），最好能重新跑

莫负家国与红颜

16楼2011-10-06 11:25:57

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moqiyilei

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1应该是你PCR体系有污染，换一瓶新灭菌的双蒸水试试；
2将你的梳子用灭菌双蒸水彻底清洗干净，然后再做胶。

17楼2011-10-07 08:33:48

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lys6827

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13楼: Originally posted by liujianmin68 at 2011-10-05 11:17:49:
1)梳子非常不干净，有杂质在点样孔里
2)胶回收产物作为模板加入量过多
3)PCR体系中酶量过多

我觉得第一和第三点有点道理，我在做实验室的时候也遇到很多次这种问题。

从胶图上看，此次PCR反应也不是很好，有很长的弥散带，引物和模板的匹配还是有问题的，可以从源头上着手改进引物的匹配度和模板的质量。

18楼2011-10-07 09:55:47

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既然有目的条带，直接切下测序就行了呀。管杂带干吗？

19楼2011-10-07 13:53:39

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angusqing

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分子量太大或者说蛋白质的问题吧，感觉根本没跑开