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huzhihong-

新虫 (小有名气)


[交流] PCR电泳,加样孔很亮,但目的条带却很淡,不知道怎么回事? 已有18人参与

如题,以胶回收产物为模板,进行第二轮PCR,做了三次,每次都是点样孔很亮,目的条带很淡,不知道为什么?请高手赐教!
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:52:25
1)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
2)胶回收产物作为模板加入量过多
3)PCR体系中酶量过多
转向地质微生物学
13楼2011-10-05 11:17:49
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粥香可爱

铜虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:51:32
切胶的时候没有切到别的条带吗?有没有阴性对照,可能PCR体系有污染
莫负家国与红颜
2楼2011-10-02 22:44:23
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粥香可爱

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
胶回收的产物没有超螺旋吗?亮的带在后面,会不会是超螺旋的质粒跑不动?
莫负家国与红颜
3楼2011-10-02 23:01:38
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chenguestc

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利! 2011-10-07 13:51:40
你的MARKER是对的,说明胶的问题不是很大(但也可能是影响因素)。
可能的原因是:(1)DNA不纯,里面蛋白质过多。
              (2)梳子非常不干净,有杂质在点样孔里
              (3)胶的浓度(过大或过小)不适合你的PCR产物

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4楼2011-10-03 09:35:30
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