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上官譞

新虫 (初入文坛)

[求助] 我做连接,总是不成功,能给分析一下原因或有好的方法吗

我做连接,用SwaⅠ酶切,平头末端,用T4连接酶25度反应一小时,总是不成功,能给分析一下原因或有好的方法吗,谢谢
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hgq115

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我现在用的都是快速连接酶16℃1-2小时,T4连接酶很久前用过,但连接时间很长,都是室温过夜的。不知道会不会是你连接时间过短的缘故?
2楼2011-09-28 16:11:58
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萝卜丝儿

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用T4一般都是室温过夜连接 都要将近20个小时了
好好学习,天天向上!
3楼2011-09-28 16:30:28
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~国庆快乐~ 2011-09-30 17:12:17
平端连接本来就效率低很多
建议16度连接过夜
4楼2011-09-28 16:42:27
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上官譞

新虫 (初入文坛)

5楼2011-09-29 08:52:50
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

连接后,4度过夜,效果好些
但愿人长久
6楼2011-09-29 09:01:00
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

粘性末端更容易连接
7楼2011-09-29 14:03:15
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不到不得已不要用平末端连接  T4连接酶一般连接10h-16h都行
冷风过心变热
8楼2011-09-29 15:12:15
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bluesea000

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~国庆快乐~ 2011-09-30 17:12:02
上官譞(金币+2): 谢谢分析,我觉得浓度和反应时间可能有问题 2011-10-17 08:16:16
1、我用的是16°连接过夜至少13小时;
2、你可以试试提高片段与质粒的比例到9:1;
3、请确认你的感受态状态是好的,不要用太久以前制备的。
4、平端连接确实效率不太高的。
9楼2011-09-29 18:18:55
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tdhslxiaoyao

新虫 (小有名气)

呵呵,只做过TA连接,受教
10楼2011-09-30 10:37:17
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