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skyqf

银虫 (初入文坛)

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[求助] 怎么从滤纸片上回收质粒

问别人借得质粒，在滤纸上，怎么回收质粒，是直接水溶还是用氯仿抽提，有没有没人用过？

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1楼 2011-09-25 20:48:44

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清风寨

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-09-26 09:15:26

我猜想找点水或者TE都行溶解一下再离心一下取上清转化一下再挑菌落一下抽质粒鉴定一下应该就可以了

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冷风过心变热

3楼2011-09-26 08:54:43

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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-09-26 09:15:12

用TE溶解尽量无菌操作溶解的转化离心后涂板

我老师5年前带回来的质粒还能用呢

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2楼2011-09-25 21:18:29

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tiny_C

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:15:43
skyqf(金币+2): 2011-09-26 09:33:01
skyqf(金币+3): 我用灭菌的去离子水溶解，电泳检测不到，转化也没有菌斑（抗性是正确的） 2011-09-26 09:34:55

我都是用30-50ul灭菌的去离子水溶解,用的时候取2-5ul转化

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4楼2011-09-26 09:00:57

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li1977li

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-26 09:16:17
silicare(BioEPI+1): 标准 2011-09-26 11:46:55

引用回帖:

1楼: Originally posted by skyqf at 2011-09-25 20:48:44:
问别人借得质粒，在滤纸上，怎么回收质粒，是直接水溶还是用氯仿抽提，有没有没人用过？

把点有质粒的部分（一般有圆圈标记）的滤纸剪下来，放入eppedolf管中，加入小体积质粒溶解液（如TE)一般50ul 即可，让质粒溶出，然后转染受体菌，扩增后纯化质粒，并对质粒进行检测以确定是否是你所要的质粒。

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5楼2011-09-26 09:04:56

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