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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎么从滤纸片上回收质粒
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skyqf

银虫 (初入文坛)

[求助] 怎么从滤纸片上回收质粒

问别人借得质粒，在滤纸上，怎么回收质粒，是直接水溶还是用氯仿抽提，有没有没人用过？
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1楼2011-09-25 20:48:44
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-09-26 09:15:12
用TE溶解   尽量无菌操作     溶解的转化   离心后涂板

我老师5年前带回来的质粒还能用呢
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2楼2011-09-25 21:18:29
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清风寨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~~ 2011-09-26 09:15:26
我猜想 找点水 或者TE都行 溶解一下再离心一下 取 上清转化一下 再挑菌落一下 抽质粒鉴定一下应该就可以了
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冷风过心变热
3楼2011-09-26 08:54:43
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tiny_C

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-09-26 09:15:43
skyqf(金币+2): 2011-09-26 09:33:01
skyqf(金币+3): 我用灭菌的去离子水溶解，电泳检测不到，转化也没有菌斑（抗性是正确的） 2011-09-26 09:34:55
我都是用30-50ul灭菌的去离子水溶解,用的时候取2-5ul转化
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4楼2011-09-26 09:00:57
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li1977li

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 鼓励交流~ 2011-09-26 09:16:17
silicare(BioEPI+1): 标准 2011-09-26 11:46:55
引用回帖:
1楼: Originally posted by skyqf at 2011-09-25 20:48:44:
问别人借得质粒，在滤纸上，怎么回收质粒，是直接水溶还是用氯仿抽提，有没有没人用过？

把点有质粒的部分（一般有圆圈标记）的滤纸剪下来，放入eppedolf管中，加入小体积质粒溶解液（如TE)一般50ul 即可，让质粒溶出，然后转染受体菌，扩增后纯化质粒，并对质粒进行检测以确定是否是你所要的质粒。
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5楼2011-09-26 09:04:56
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skyqf

银虫 (初入文坛)
谢谢:可是我用灭菌的区离子水溶解电泳检测不到质粒，转化涂板也没有菌斑长出
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6楼2011-09-26 09:37:39
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tiny_C

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by skyqf at 2011-09-26 09:37:39:
谢谢:可是我用灭菌的区离子水溶解电泳检测不到质粒，转化涂板也没有菌斑长出

你溶解了就直接电泳的？这个我没有试过，不知道怎么样。
加水后用枪多冲洗几次滤纸，或者把滤纸用枪头戳戳
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7楼2011-09-26 11:20:39
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skyqf

银虫 (初入文坛)
我再试试吧谢谢~~~
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8楼2011-09-26 11:29:01
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xiangrun55

新虫 (初入文坛)
用水或者质粒试剂盒里的Elution buffer直接溶解，然后转化一下就可以了。
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9楼2011-09-26 12:24:42
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