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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 设计的引物错了一个碱基对后续试验影响大吗？
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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)

[求助] 设计的引物错了一个碱基对后续试验影响大吗？

如题，设计的引物错了一个碱基，用它所扩增出的目的片段有问题吗？
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1楼 2011-09-05 16:44:50
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瓶儿花

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
wanhscn(金币+1): 有时做标记时，为了照顾酶切位点，只能在引物上选错配。 2011-09-05 17:00:25
你如果是用作表达的话，你查一下这个碱基编码的蛋白跟原始的有没有差异，会不会有影响就可以了。如果单单是克隆序列的话，研究基因功能一般是没多大影响的，除非你的碱基跟相邻碱基变成终止密码子了。
另外 ，如果是在5‘端，影响不大。有的时候引物设计酶切位点就是要把碱基换掉的呀！
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2楼2011-09-05 16:49:21
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love_st

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 瓶儿花 at 2011-09-05 16:49:21:
你如果是用作表达的话，你查一下这个碱基编码的蛋白跟原始的有没有差异，会不会有影响就可以了。如果单单是克隆序列的话，研究基因功能一般是没多大影响的，除非你的碱基跟相邻碱基变成终止密码子了。
另外 ，如 ...

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3楼2011-09-05 16:55:41
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lixingliang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-09-05 18:38:47
niuniu2010(金币+2): 2011-09-06 08:31:37
不知道楼主克隆这个基因是用来做什么，如果是用于表达蛋白，就需要看看会不会产生移码突变，如果单单是克隆一个基因，那影响应该不大
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我不管你看起看不起我，我都是个演员
4楼2011-09-05 17:52:37
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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)
我目的是为了表达蛋白用的，如果不产生移码突变是不是问题就不大呀？
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5楼2011-09-06 08:42:24
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niuniu2010

铜虫 (初入文坛)
‘有的时候引物设计酶切位点就是要把碱基换掉的呀！’
我还真不知道，就是换掉碱基应该也有原则吧？
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6楼2011-09-06 09:20:04
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sfb1020

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by niuniu2010 at 2011-09-06 08:42:24:
我目的是为了表达蛋白用的，如果不产生移码突变是不是问题就不大呀？

即使没有移码突变，还要看看这个突变的碱基所在的氨基酸有没有改变，有变化也不行，尤其是从疏水氨基酸变为亲水氨基酸，或者相反。
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7楼2011-09-06 09:38:13
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