应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE
汕头大学海洋科学接受调剂
141/2返回列表12下一页
查看: 1584  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳，不知道什么原因跑出来的结果没有条带，我是跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟（做了两次，一次五分钟，一次十分钟），上样20µl，浓缩胶跑的电压是90v，分离胶是120v，跑出来的结果是MAEKER正常，其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题（一块制的胶）。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀，第一次遇见这种情况，请大家帮忙分析一下原因。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
山水凤凰
1楼 2011-09-02 21:55:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一毫升的枪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

话说你的全菌体是怎么取的？
赞一下 回复此楼
2楼2011-09-03 05:38:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hnzhaolongfei
3楼2011-09-03 07:02:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2011-09-03 05:38:14:
话说你的全菌体是怎么取的？

就是取诱导后的发酵液直接离心得到全菌体
赞一下 回复此楼
山水凤凰
4楼2011-09-03 10:24:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-03 17:12:27
跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗？超声试试。你的金属浴温度到了１００度，ＥＰ管内的菌体受到温度还是比这个低的。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liukgg
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
5楼2011-09-03 17:02:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
送鲜花一朵
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-03 17:02:20:
跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗？超声试试。你的金属浴温度到了１００度，ＥＰ管内的菌体受到温度还是比这个低的。

以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题，不知道这次是怎么回事。今天超声试过了，跑完电泳能看到条带，但是特别的淡，而没有超声的还是什么也看不到，开来问题肯定是出在菌体破碎上了，重新诱导试一下吧
赞一下(1人) 回复此楼
山水凤凰
6楼2011-09-03 21:16:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beckham_zxsy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liukgg(金币+1): 谢谢回帖 2011-09-04 01:22:19
离心收获菌体收到的量大吗？是不是摇菌有问题啊
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-03 23:24:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励热心交流 2011-09-04 09:49:05
引用回帖:
7楼: Originally posted by beckham_zxsy at 2011-09-03 23:24:21:
离心收获菌体收到的量大吗？是不是摇菌有问题啊

挺大的，因为诱导的时间长一些，所以比一般的大肠杆菌诱导完后得到的菌体要多，明天再试一次看看吧，第一次做谷棒的菌
赞一下(1人) 回复此楼
山水凤凰
8楼2011-09-04 01:21:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-09-04 18:54:35
引用回帖:
6楼: Originally posted by liukgg at 2011-09-03 21:16:23:
以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题，不知道这次是怎么回事。今天超声试过了，跑完电泳能看到条带，但是特别的淡，而没有超声的还是什么也看不到，开来问题肯定是出在菌体破碎上了，重新诱导试一下吧

破碎时可以做镜检，破碎前后看看菌还有多少。
赞一下(1人) 回复此楼
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
9楼2011-09-04 10:30:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-04 10:30:20:
破碎时可以做镜检，破碎前后看看菌还有多少。

恩，下次试一下吧，3Q
赞一下 回复此楼
山水凤凰
10楼2011-09-04 13:17:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liukgg 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297求调剂 +22 ORCHID1 2026-04-10 25/1250 2026-04-13 23:11 by pies112
[考研] 各位老师好，求调剂，本科211，一志愿天津大学生物与医药学硕，差两名录取。 +9 路六六jjj 2026-04-13 9/450 2026-04-13 22:49 by pies112
[考研] 材料085601调剂 +31 何润采123 2026-04-10 33/1650 2026-04-13 21:42 by 学员JpLReM
[考研] 材料复试求调剂 +24 xhhdjdjsjks 2026-04-09 24/1200 2026-04-13 15:49 by 幸免 ..
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 290调剂生物0860 +28 哇哈哈，。 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 01:16 by 幸免 ..
[考研] 求调剂 +18 MAX怅惘 2026-04-09 20/1000 2026-04-11 23:31 by zhen～
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 343求调剂 +9 王国帅 2026-04-10 9/450 2026-04-11 20:31 by dongdian1
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +12 archer.. 2026-04-10 13/650 2026-04-11 08:44 by zhq0425
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 331求调剂 +5 luoxin0706. 2026-04-08 5/250 2026-04-08 22:15 by zhouyuwinner
[考研] 求调剂，现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-07 11/550 2026-04-07 15:13 by shdgaomin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭