应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE
141/2返回列表12下一页
查看: 1867  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳，不知道什么原因跑出来的结果没有条带，我是跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟（做了两次，一次五分钟，一次十分钟），上样20µl，浓缩胶跑的电压是90v，分离胶是120v，跑出来的结果是MAEKER正常，其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题（一块制的胶）。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀，第一次遇见这种情况，请大家帮忙分析一下原因。谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
山水凤凰
1楼 2011-09-02 21:55:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一毫升的枪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

话说你的全菌体是怎么取的？
赞一下 回复此楼
2楼2011-09-03 05:38:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hnzhaolongfei
3楼2011-09-03 07:02:35
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2011-09-03 05:38:14:
话说你的全菌体是怎么取的？

就是取诱导后的发酵液直接离心得到全菌体
赞一下 回复此楼
山水凤凰
4楼2011-09-03 10:24:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-03 17:12:27
跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗？超声试试。你的金属浴温度到了１００度，ＥＰ管内的菌体受到温度还是比这个低的。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

liukgg
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
5楼2011-09-03 17:02:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
送鲜花一朵
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-03 17:02:20:
跑的全菌体，加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗？超声试试。你的金属浴温度到了１００度，ＥＰ管内的菌体受到温度还是比这个低的。

以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题，不知道这次是怎么回事。今天超声试过了，跑完电泳能看到条带，但是特别的淡，而没有超声的还是什么也看不到，开来问题肯定是出在菌体破碎上了，重新诱导试一下吧
赞一下(1人) 回复此楼
山水凤凰
6楼2011-09-03 21:16:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beckham_zxsy

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

liukgg(金币+1): 谢谢回帖 2011-09-04 01:22:19
离心收获菌体收到的量大吗？是不是摇菌有问题啊
赞一下 回复此楼
7楼2011-09-03 23:24:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励热心交流 2011-09-04 09:49:05
引用回帖:
7楼: Originally posted by beckham_zxsy at 2011-09-03 23:24:21:
离心收获菌体收到的量大吗？是不是摇菌有问题啊

挺大的，因为诱导的时间长一些，所以比一般的大肠杆菌诱导完后得到的菌体要多，明天再试一次看看吧，第一次做谷棒的菌
赞一下(1人) 回复此楼
山水凤凰
8楼2011-09-04 01:21:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)
★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-09-04 18:54:35
引用回帖:
6楼: Originally posted by liukgg at 2011-09-03 21:16:23:
以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题，不知道这次是怎么回事。今天超声试过了，跑完电泳能看到条带，但是特别的淡，而没有超声的还是什么也看不到，开来问题肯定是出在菌体破碎上了，重新诱导试一下吧

破碎时可以做镜检，破碎前后看看菌还有多少。
赞一下(1人) 回复此楼
只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
9楼2011-09-04 10:30:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-04 10:30:20:
破碎时可以做镜检，破碎前后看看菌还有多少。

恩，下次试一下吧，3Q
赞一下 回复此楼
山水凤凰
10楼2011-09-04 13:17:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liukgg 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +3 archvillain 2026-08-15 3/150 2026-08-15 11:22 by 医学老男孩
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 7/350 2026-08-15 09:09 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +11 Tide man 2026-08-10 12/600 2026-08-15 02:12 by home3163
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭