24小时热门版块排行榜    

查看: 1542  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳,不知道什么原因跑出来的结果没有条带,我是跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟(做了两次,一次五分钟,一次十分钟),上样20µl,浓缩胶跑的电压是90v,分离胶是120v,跑出来的结果是MAEKER正常,其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题(一块制的胶)。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀,第一次遇见这种情况,请大家帮忙分析一下原因。谢谢
回复此楼
山水凤凰
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
送鲜花一朵
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-03 17:02:20:
跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗?超声试试。你的金属浴温度到了100度,EP管内的菌体受到温度还是比这个低的。

以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题,不知道这次是怎么回事。今天超声试过了,跑完电泳能看到条带,但是特别的淡,而没有超声的还是什么也看不到,开来问题肯定是出在菌体破碎上了,重新诱导试一下吧
山水凤凰
6楼2011-09-03 21:16:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

一毫升的枪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

话说你的全菌体是怎么取的?
2楼2011-09-03 05:38:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2011-09-03 05:38:14:
话说你的全菌体是怎么取的?

就是取诱导后的发酵液直接离心得到全菌体
山水凤凰
4楼2011-09-03 10:24:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-03 17:12:27
跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗?超声试试。你的金属浴温度到了100度,EP管内的菌体受到温度还是比这个低的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
5楼2011-09-03 17:02:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 【双一流院校新能源、环境材料,材料加工与模拟招收大量调剂】 +4 Higraduate 2026-03-22 7/350 2026-03-24 11:23 by 种大树
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 材料与化工(0856)304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
信息提示
请填处理意见