24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1593  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE

最近做谷氨酸棒杆菌诱导蛋白的蛋白电泳,不知道什么原因跑出来的结果没有条带,我是跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟(做了两次,一次五分钟,一次十分钟),上样20µl,浓缩胶跑的电压是90v,分离胶是120v,跑出来的结果是MAEKER正常,其他泳道什么都没有。自己一块跑的纯化的蛋白没有问题(一块制的胶)。诱导后的发酵液取100µl后离心能都看到挺多的菌体沉淀,第一次遇见这种情况,请大家帮忙分析一下原因。谢谢
回复此楼
山水凤凰
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

塞外雨

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-09-03 17:12:27
跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗?超声试试。你的金属浴温度到了100度,EP管内的菌体受到温度还是比这个低的。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

只想找到关心我、在我犹豫时能给我判断的人
5楼2011-09-03 17:02:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

一毫升的枪

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

话说你的全菌体是怎么取的?
2楼2011-09-03 05:38:14
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 一毫升的枪 at 2011-09-03 05:38:14:
话说你的全菌体是怎么取的?

就是取诱导后的发酵液直接离心得到全菌体
山水凤凰
4楼2011-09-03 10:24:30
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liukgg

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
送鲜花一朵
dhd997(金币+3): good 2011-09-04 09:48:52
引用回帖:
5楼: Originally posted by 塞外雨 at 2011-09-03 17:02:20:
跑的全菌体,加上loading buffer后100℃金属浴5/10分钟
这样能把菌体完全裂解吗?超声试试。你的金属浴温度到了100度,EP管内的菌体受到温度还是比这个低的。

以前做大肠杆菌的诱导时这样完全没有问题,不知道这次是怎么回事。今天超声试过了,跑完电泳能看到条带,但是特别的淡,而没有超声的还是什么也看不到,开来问题肯定是出在菌体破碎上了,重新诱导试一下吧
山水凤凰
6楼2011-09-03 21:16:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 327求调剂 +24 Xxjc1107. 2026-04-13 26/1300 2026-04-15 19:27 by coolfishwll
[考研] 08工学 309分求调剂 +12 Yin DY 2026-04-08 12/600 2026-04-14 17:49 by lhj2009
[考研] 297求调剂 +23 ORCHID1 2026-04-10 26/1300 2026-04-14 13:52 by 陈皮皮
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 245求调剂 +6 冰糖橘?汽水 2026-04-13 10/500 2026-04-14 10:49 by jyl0317
[考研] 085600材料与化工349分求调剂 +16 李木子啊哈哈 2026-04-12 17/850 2026-04-14 09:11 by fenglj492
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 一志愿浙大生物325分求调剂 +9 zysheng 2026-04-12 9/450 2026-04-12 22:31 by yuyin1233
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 一志愿西北工业大学289 085602 +33 yang婷 2026-04-10 34/1700 2026-04-12 08:11 by Art1977
[考研] 331求调剂 +5 王国帅 2026-04-11 5/250 2026-04-11 22:56 by 溪涧流水
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +7 0856?调剂 2026-04-10 7/350 2026-04-11 21:33 by 蓝云思雨
[考研] 调剂 +6 青灯不负 2026-04-09 6/300 2026-04-11 20:35 by dongdian1
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 考研调剂 +26 硕星赴 2026-04-09 27/1350 2026-04-10 22:24 by 猪会飞
[考研] 一志愿华东师范生物学326分,求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 材料专硕初试分332一志愿西北工业大学, +12 故人?? 2026-04-09 12/600 2026-04-09 18:34 by Ccclqqq
信息提示
请填处理意见