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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 融合蛋白不挂柱，急！
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甜酒慢品

金虫 (初入文坛)

小木虫

[求助] 融合蛋白不挂柱，急！

大家好，我最近实验遇到了一个问题要请教大家。
我做的是一个膜蛋白的异源表达，载体用的是Bio rad的pPAL7载体，这个载体有一个特色，就是它的tag在我的蛋白质的N端，一旦elution buffer中有氯离子则tag和我的目的蛋白会自动切开。我们通过这个Tag同柱子的亲和层析纯化我的目的蛋白，然后再加入含有氯离子的溶液得到我的目的蛋白。
tag等电点9.0大小8.3kd，目的蛋白等电点11.7大小5.7kd，融合蛋白等电点9.64（软件预测），wash buffer是磷酸钠溶液 pH7.2，融合蛋白在包涵体和可溶性部分均有表达。我每次都摇200ml的菌提取蛋白，可是每次做亲和层析都发现与柱子不结合（可溶性部分和包涵体都试过），望大家指点迷津啊！
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还是那个我，简单，哀愁，幸福，疲惫。。。
1楼 2011-09-02 14:01:18
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kid0i

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-09-30 07:42:38
先跑个胶看看菌体蛋白的情况，并且做control组看看有什么区别。
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7楼2011-09-30 00:59:24
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

甜酒慢品(金币+1): 谢谢啊！ 2011-09-05 10:08:35
甜酒慢品(金币+1): 2011-09-14 10:35:00
你的上柱条件是什么啊？
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2楼2011-09-02 14:45:15
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甜酒慢品

金虫 (初入文坛)

小木虫
引用回帖:
2楼: Originally posted by 辉辉集团 at 2011-09-02 14:45:15:
你的上柱条件是什么啊？

你好，我用的是普通的旋转柱做的，只要加溶液进去就行了。
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还是那个我，简单，哀愁，幸福，疲惫。。。
3楼2011-09-02 14:52:31
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辉辉集团

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 甜酒慢品 at 2011-09-02 14:52:31:
你好，我用的是普通的旋转柱做的，只要加溶液进去就行了。

啊 这么高级啊 我有点搞不懂了
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4楼2011-09-02 15:27:36
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