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融合蛋白不挂柱，急！
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大家好，我最近实验遇到了一个问题要请教大家。 我做的是一个膜蛋白的异源表达，载体用的是Bio rad的pPAL7载体，这个载体有一个特色，就是它的tag在我的蛋白质的N端，一旦elution buffer中有氯离子则tag和我的目的蛋白会自动切开。我们通过这个Tag同柱子的亲和层析纯化我的目的蛋白，然后再加入含有氯离子的溶液得到我的目的蛋白。 tag等电点9.0大小8.3kd，目的蛋白等电点11.7大小5.7kd，融合蛋白等电点9.64（软件预测），wash buffer是磷酸钠溶液 pH7.2，融合蛋白在包涵体和可溶性部分均有表达。我每次都摇200ml的菌提取蛋白，可是每次做亲和层析都发现与柱子不结合（可溶性部分和包涵体都试过），望大家指点迷津啊！ |
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