| 查看: 2707 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
融合蛋白不挂柱，急！
|
|||
|
大家好，我最近实验遇到了一个问题要请教大家。 我做的是一个膜蛋白的异源表达，载体用的是Bio rad的pPAL7载体，这个载体有一个特色，就是它的tag在我的蛋白质的N端，一旦elution buffer中有氯离子则tag和我的目的蛋白会自动切开。我们通过这个Tag同柱子的亲和层析纯化我的目的蛋白，然后再加入含有氯离子的溶液得到我的目的蛋白。 tag等电点9.0大小8.3kd，目的蛋白等电点11.7大小5.7kd，融合蛋白等电点9.64（软件预测），wash buffer是磷酸钠溶液 pH7.2，融合蛋白在包涵体和可溶性部分均有表达。我每次都摇200ml的菌提取蛋白，可是每次做亲和层析都发现与柱子不结合（可溶性部分和包涵体都试过），望大家指点迷津啊！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 科研专列 |
» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有57人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- GST融合蛋白表达纯化
已经有5人回复
- 融合蛋白的linker怎么设计
已经有14人回复
- 融合蛋白在不同细胞系表达
已经有4人回复
- 高等电点（pI8.3）his融合蛋白纯化，选用何种缓冲液？
已经有7人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 融合蛋白在大肠杆菌中的表达，怎么被我越做越复杂了？
已经有8人回复
- 【求助/交流】重组蛋白融合标签的选择
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于GFP融合的蛋白的一些问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白的Amylose亲和层析
已经有11人回复
- 【求助/交流】表达蛋白为什么要通过融合蛋白？
已经有4人回复
- 【求助/交流】蛋白不挂柱怎么办
已经有11人回复
charlie2800
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4252.8
- 红花: 2
- 帖子: 644
- 在线: 174.7小时
- 虫号: 555732
- 注册: 2008-05-09
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2011-09-03 13:56:14
2楼2011-09-02 14:45:15
3楼2011-09-02 14:52:31
4楼2011-09-02 15:27:36
20