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[交流]
关于改良CTAB法提取RNA的问题~~
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哪位虫友用过改良的CTAB法提取过RNA啊，我加Licl沉降RNA的时候为什么会分层呢。。。方便交流，把步骤贴出来： 1、 取 1 . 5 mL的 Eppendo rf离心管,分别加入 500 uL 的 2 XCTAB液, 再分别加入少量 PVP40( 0 . 5~ 1 . 0m g ),振荡 混匀。 2、分别取 0 . 4~ 0 . 5 g材料于研钵中, 液氮研磨,然后将研 磨粉末加入离心管中, 混匀并标记。 3、离心管于 65度 水浴 10 m in , 期间不停的摇动, 但不要 太剧烈。 4、向 管中加入等体积 500 UL的氯仿 ：异戊醇( 241), 12 000 rpm 4度 离心 10m i n。 5、 取上清液于新离心管中并标记, 重复步骤4。 6、取上清液于新离心管中。 用等体积的 L i C l 。置于冰箱中, - 4度 冷冻 15 m i n。12 000 rpm 4度 离心 10 m i n。 7、 弃上清液, 用 75%的乙醇清洗沉淀, 离心 5 m i n 。 做到6时，加入Licl会出现分层，继续往后做，也没有沉淀，跑胶也是空空如野。。。 |
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