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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于改良CTAB法提取RNA的问题~~
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)

[交流] 关于改良CTAB法提取RNA的问题~~

哪位虫友用过改良的CTAB法提取过RNA啊，我加Licl沉降RNA的时候为什么会分层呢。。。方便交流，把步骤贴出来：
1、 取 1 . 5 mL的 Eppendo rf离心管,分别加入 500 uL
的 2 XCTAB液, 再分别加入少量 PVP40( 0 . 5~ 1 . 0m g ),振荡
混匀。
 2、分别取 0 . 4~ 0 . 5 g材料于研钵中, 液氮研磨,然后将研
磨粉末加入离心管中, 混匀并标记。
 3、离心管于 65度 水浴 10 m in , 期间不停的摇动, 但不要
太剧烈。
4、向 管中加入等体积 500 UL的氯仿 ：异戊醇( 241), 12 000 rpm  4度
离心 10m i n。
5、 取上清液于新离心管中并标记, 重复步骤4。
6、取上清液于新离心管中。 用等体积的 L i C l 。置于冰箱中, - 4度 冷冻 15 m i n。12 000 rpm 4度 离心 10 m i n。
7、 弃上清液, 用 75%的乙醇清洗沉淀, 离心 5 m i n 。
做到6时，加入Licl会出现分层，继续往后做，也没有沉淀，跑胶也是空空如野。。。
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1楼 2011-09-01 11:07:51
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1179890371

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LICL应该放置至少4个小时或者过夜。
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-22 00:07:54
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w2boluo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+2): Good 2011-09-01 18:13:09
加LiCl以后不混匀么？？
等体积饱和氯化锂沉淀比较常用，如果玩不转，0.6倍异丙醇沉淀也行，但都要混匀。基本都有肉眼可见的浑浊，离心后有大块沉淀。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2011-09-01 12:55:26
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wanghd2826

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by w2boluo at 2011-09-01 12:55:26:
加LiCl以后不混匀么？？
等体积饱和氯化锂沉淀比较常用，如果玩不转，0.6倍异丙醇沉淀也行，但都要混匀。基本都有肉眼可见的浑浊，离心后有大块沉淀。

恩 重新来了一下 效果还不错，可能是氯仿：异戊醇那一步没混匀导致裂解不充分。
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4楼2011-09-02 15:37:13
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