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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……
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青色的知了

木虫 (小有名气)

[求助] 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……

代朋友问的，不是很懂，希望大家能给点意见，不甚感激
    目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……是为什么呢？
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1楼 2011-08-26 22:06:53
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无踪无影

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4575955楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-05-21 10:01:42
问问大侠，这个感受态转化的话，温度42度超过了会有影响吗？涂板的时候手法有什么需要注意的吗？谢谢啦...

谢谢啦，我现在大肠杆菌转化重组质粒pET28涂板就是长不出来，涂板有什么手法技巧吗
赞一下 回复此楼
一切皆有可能
8楼2012-05-31 08:57:31
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查看全部 8 个回答

ET生物人

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:35
抗生素有无加错？？
赞一下 回复此楼
2楼2011-08-26 22:19:29
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-08-27 09:26:20
青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:42
原因太多
1 连接没做好
2 抗生素有无加错（1楼）
3 没有转进感受态里去
赞一下(2人) 回复此楼
真相是最大的奢侈品
3楼2011-08-26 22:28:16
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-08-27 09:26:31
青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:48
首先排除楼上所指出的问题
其次要做好对照，现在不长菌落，至少要在做转化的时候转一个同你的T-vector相同抗性的质粒看看是不是你的感受态有问题了，同时更精细的，你需要计算你的感受态效率。
如果这些都没有问题，你应该看看你的片段是不是需要加A，或者说是不是KOD之类的PCR系统，如果PCR产物是平端的，是没有办法直接进行TA克隆的！

PS，如果是这样，你的T-vector倒是质量不错啊，呵呵
赞一下(2人) 回复此楼
致良知
4楼2011-08-26 23:17:13
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