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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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青色的知了

木虫 (小有名气)

[求助] 目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……

代朋友问的,不是很懂,希望大家能给点意见,不甚感激
    目的片段和T1载体连接后转入感受态细胞涂板子总不长菌……是为什么呢?
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ET生物人

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:35
抗生素有无加错??
2楼2011-08-26 22:19:29
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-08-27 09:26:20
青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:42
原因太多
1 连接没做好
2 抗生素有无加错(1楼)
3 没有转进感受态里去
真相是最大的奢侈品
3楼2011-08-26 22:28:16
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quiller2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): 鼓励交流 2011-08-27 09:26:31
青色的知了(金币+5): 2011-08-27 19:46:48
首先排除楼上所指出的问题
其次要做好对照,现在不长菌落,至少要在做转化的时候转一个同你的T-vector相同抗性的质粒看看是不是你的感受态有问题了,同时更精细的,你需要计算你的感受态效率。
如果这些都没有问题,你应该看看你的片段是不是需要加A,或者说是不是KOD之类的PCR系统,如果PCR产物是平端的,是没有办法直接进行TA克隆的!

PS,如果是这样,你的T-vector倒是质量不错啊,呵呵
致良知
4楼2011-08-26 23:17:13
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无踪无影

金虫 (小有名气)

引用回帖:
695164楼: Originally posted by wanhscn at 2011-08-26 22:28:16:
原因太多
1 连接没做好
2 抗生素有无加错(1楼)
3 没有转进感受态里去

问问大侠,这个感受态转化的话,温度42度超过了会有影响吗?涂板的时候手法有什么需要注意的吗?谢谢啦
一切皆有可能
5楼2012-05-21 10:01:42
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bst5

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4575955楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-05-21 10:01:42
问问大侠,这个感受态转化的话,温度42度超过了会有影响吗?涂板的时候手法有什么需要注意的吗?谢谢啦...

转化温度要严格控制,关键
6楼2012-05-30 16:31:03
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

7楼2012-05-30 22:26:31
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无踪无影

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4575955楼: Originally posted by 无踪无影 at 2012-05-21 10:01:42
问问大侠,这个感受态转化的话,温度42度超过了会有影响吗?涂板的时候手法有什么需要注意的吗?谢谢啦...

谢谢啦,我现在大肠杆菌转化重组质粒pET28涂板就是长不出来,涂板有什么手法技巧吗
一切皆有可能
8楼2012-05-31 08:57:31
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