| 查看: 3188 | 回复: 13 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
通用引物扩增细菌16S rDNA
|
||
|
我用通用引物扩增细菌16S rDNA，直接菌落PCR，我试了7、8次，每次都有700bp左右的的非特异性扩增，目的片段也有，在1500bp左右，我老师说他以前一做就出来了，根本没有非特异性扩增，为什么我每次都有呢，请各位虫友帮帮我~~~PCR体系如下（50uL体系）： 10*Buffer 5UL MgCl2（50mM） 2uL 引物a（10uL） 1.5uL 引物b（10uL） 1.5uL dNTP（10mM） 1uL Taq酶（2U/uL） 1uL 模板 枪头蘸取一点菌 ddH2O 38uL ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 94度预变性5min 94度 45s 56度 45s 72度 90s 30个循环 问题到底出在哪里呢？我的退火温度从55-59度都试过，59度就没有条带了，引物从1、1.5、2uL的都试过，预变性时间从5、10、12min都试过，还试过把前一次PCR产物取1uL做模板，都有非特异性条带，为么捏？？？望大虾不吝赐教，小女先谢谢大家了~~ |
回复此楼» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有51人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有5人回复
-
26申博自荐
已经有3人回复
-
A期刊撤稿
已经有4人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有17人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有22人回复
-
EST投稿状态问题
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR-DGGE的引物设计
已经有5人回复
- 要做DGGE，真菌有没有通用引物？
已经有6人回复
- 16S rDNA测序问题
已经有3人回复
- 16s rDNA 扩增引物的选择
已经有9人回复
- 【求助/交流】细菌16SDNA的通用引物
已经有12人回复
- 【求助/交流】求助如何设计植物rDNA ITS区的扩增引物
已经有4人回复
- 【求助/交流】土壤采样及DGGE问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌鉴定
已经有14人回复
- 【求助/交流】细菌16s rDNA 通用引物
已经有5人回复
- 【求助/交流】提取的DNA不经过PCR是否可以直接进行DGGE
已经有7人回复
3楼2011-08-19 22:15:20
2楼2011-08-19 16:31:23
wqj1988926
金虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1222
- 散金: 27
- 红花: 5
- 帖子: 929
- 在线: 225.6小时
- 虫号: 1156883
- 注册: 2010-11-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2011-08-20 09:00:12
5楼2011-08-20 09:36:00