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calise007

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 关于RNA提取的问题

请问各位前辈有没有提取细菌RNA详细步骤的参考资料或文献,有没有直接提取细菌16SrRNA的方法?
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

calise007(金币+5): 2011-08-19 16:37:39
我们提rna一般采用的是trizol试剂,也不是很贵,有详细的提取步骤的,效果还不错,最重要的还是前期对物品的处理,避免rnase降解rna
风雪夜归人
2楼2011-08-19 11:00:47
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calise007

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
1楼: Originally posted by calise007 at 2011-08-19 09:10:13:
请问各位前辈有没有提取细菌RNA详细步骤的参考资料或文献,有没有直接提取细菌16SrRNA的方法?

这个我也有在用,请问你们前期怎么处理能否给出一个详细的步骤,我想你们学习一下。谢谢。
3楼2011-08-19 11:20:53
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calise007

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-19 11:00:47:
我们提rna一般采用的是trizol试剂,也不是很贵,有详细的提取步骤的,效果还不错,最重要的还是前期对物品的处理,避免rnase降解rna

呵呵,不好意思,引用错了。请问前期你们怎么处理,能否介绍一下详细步骤及注意事项,小弟,新手刚接触这一块有很多地方不太熟悉,想向你们学习一下。谢谢。
4楼2011-08-19 11:22:56
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

最重要的是采用千分之一的DEPC对使用的枪头、EP管、研钵等试验用品浸泡24h,使用的试剂也要用DEPC处理过的水配置。
风雪夜归人
5楼2011-08-19 21:04:29
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quiller2000

木虫 (著名写手)

你提取16S是做什么的呢?其实细菌RNA的分离,尤其是革兰氏阴性细菌是非常容易的。革兰氏阳性细菌,Bs之类的,可能由于细胞破碎比较困难,提取要麻烦一些,但是也很正常。如果还是不行,估计你需要用一些特殊的试剂来试试了。
致良知
6楼2011-08-19 23:50:29
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calise007

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-08-19 23:50:29:
你提取16S是做什么的呢?其实细菌RNA的分离,尤其是革兰氏阴性细菌是非常容易的。革兰氏阳性细菌,Bs之类的,可能由于细胞破碎比较困难,提取要麻烦一些,但是也很正常。如果还是不行,估计你需要用一些特殊的试剂 ...

革兰氏阳性菌可能细胞壁比较厚,请问特殊试剂都有哪些?比如溶菌酶之类的?
7楼2011-08-20 08:50:10
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quiller2000

木虫 (著名写手)

不能用溶菌酶,处理时间长了,你分离的RNA已经不是生理状态的RNA了,我们现在还没有找到一个很好的的办法,不过我们有一种自己开发试剂,可以保证细胞中的RNA不会发生变化了,这样再慢慢的磨也可以。此外bead-beater可以试试,国产的就算了哈。
致良知
8楼2011-08-20 09:39:44
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)

你可以去河南惠尔纳米公司的公司主页找找,有各种试剂盒和提取的说明书
既然选择了远方,便只顾风雨兼程
9楼2012-05-03 09:59:33
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