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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于RNA提取的问题
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calise007

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 关于RNA提取的问题

请问各位前辈有没有提取细菌RNA详细步骤的参考资料或文献，有没有直接提取细菌16SrRNA的方法？
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1楼 2011-08-19 09:10:13
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wqj1988926

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

calise007(金币+5): 2011-08-19 16:37:39
我们提rna一般采用的是trizol试剂，也不是很贵，有详细的提取步骤的，效果还不错，最重要的还是前期对物品的处理，避免rnase降解rna
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风雪夜归人
2楼2011-08-19 11:00:47
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calise007

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
1楼: Originally posted by calise007 at 2011-08-19 09:10:13:
请问各位前辈有没有提取细菌RNA详细步骤的参考资料或文献，有没有直接提取细菌16SrRNA的方法？

这个我也有在用，请问你们前期怎么处理能否给出一个详细的步骤，我想你们学习一下。谢谢。
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3楼2011-08-19 11:20:53
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calise007

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wqj1988926 at 2011-08-19 11:00:47:
我们提rna一般采用的是trizol试剂，也不是很贵，有详细的提取步骤的，效果还不错，最重要的还是前期对物品的处理，避免rnase降解rna

呵呵，不好意思，引用错了。请问前期你们怎么处理，能否介绍一下详细步骤及注意事项，小弟，新手刚接触这一块有很多地方不太熟悉，想向你们学习一下。谢谢。
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4楼2011-08-19 11:22:56
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wqj1988926

金虫 (正式写手)
最重要的是采用千分之一的DEPC对使用的枪头、EP管、研钵等试验用品浸泡24h，使用的试剂也要用DEPC处理过的水配置。
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风雪夜归人
5楼2011-08-19 21:04:29
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quiller2000

木虫 (著名写手)
你提取16S是做什么的呢？其实细菌RNA的分离，尤其是革兰氏阴性细菌是非常容易的。革兰氏阳性细菌，Bs之类的，可能由于细胞破碎比较困难，提取要麻烦一些，但是也很正常。如果还是不行，估计你需要用一些特殊的试剂来试试了。
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致良知
6楼2011-08-19 23:50:29
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calise007

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by quiller2000 at 2011-08-19 23:50:29:
你提取16S是做什么的呢？其实细菌RNA的分离，尤其是革兰氏阴性细菌是非常容易的。革兰氏阳性细菌，Bs之类的，可能由于细胞破碎比较困难，提取要麻烦一些，但是也很正常。如果还是不行，估计你需要用一些特殊的试剂 ...

革兰氏阳性菌可能细胞壁比较厚，请问特殊试剂都有哪些？比如溶菌酶之类的？
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7楼2011-08-20 08:50:10
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quiller2000

木虫 (著名写手)
不能用溶菌酶，处理时间长了，你分离的RNA已经不是生理状态的RNA了，我们现在还没有找到一个很好的的办法，不过我们有一种自己开发试剂，可以保证细胞中的RNA不会发生变化了，这样再慢慢的磨也可以。此外bead-beater可以试试，国产的就算了哈。
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致良知
8楼2011-08-20 09:39:44
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)
你可以去河南惠尔纳米公司的公司主页找找，有各种试剂盒和提取的说明书
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既然选择了远方，便只顾风雨兼程
9楼2012-05-03 09:59:33
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