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lsx08

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[求助] RP-HPLC分离蛋白质

我现在在做用RP-HPLC分离蛋白质，分离效果一直不理想（见谱图），已尝试多种流动相，结果是目标峰与前面的杂峰分离不开，达不到基线分离，希望各位高手可以指导一下，十分谢谢！色谱条件:C18色谱柱（4.6×250mm,300A）;流动相是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈;检测波长228nm，采用梯度洗脱。

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1楼 2011-08-15 12:30:34

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simber

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★
adslye(金币+1): 鼓励交流，祝顺利！ 2011-08-15 17:55:36

虽然不知道，帮顶。感觉目标峰拖尾很长，是不是考虑换根色谱柱试试看。

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2楼2011-08-15 15:33:06

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【答案】应助回帖

★
adslye(金币+1): 鼓励交流~祝顺利！ 2011-08-15 17:55:22
lsx08(金币+2): 谢谢回复，我尝试一下。 2011-08-16 09:21:57

可以延长时间试试，或者在杂峰和目的峰时减缓梯度变化，来达到分离效果。

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3楼2011-08-15 16:09:55

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lsx08

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引用回帖:

2楼: Originally posted by simber at 2011-08-15 15:33:06:
虽然不知道，帮顶。感觉目标峰拖尾很长，是不是考虑换根色谱柱试试看。

嗯，谢谢回复交流！

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4楼2011-08-16 09:19:40

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梧桐如雪

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【答案】应助回帖

lsx08(金币+2): 谢谢回帖，请问你们后来买的什么牌子的离子柱？ 2011-08-17 08:37:28

虽然我不懂，但我们公司以前出现过这种状况，买了根离子柱，分开了，呵呵。

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5楼2011-08-16 22:25:24

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lpw106

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楼上说的对。可以考虑换根其他的柱子。SEC

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6楼2011-09-02 11:25:07

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labrat

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Better solution is to change column to SEC column, else can try this combination for hydrophobic protein:
Buffer A: water, 50% formic acid
Buffer B: isopropanol, 5% formic acid
Gradient: 0-100% A to B

some use acetonitrile, you can try combination.

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lsx08

7楼2011-09-02 17:16:16

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lsx08

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送鲜花一朵

引用回帖:

7楼: Originally posted by labrat at 2011-09-02 17:16:16:
Better solution is to change column to SEC column, else can try this combination for hydrophobic protein:
Buffer A: water, 50% formic acid
Buffer B: isopropanol, 5% formic acid
Gradient: 0-100% ...

Thank you for your suggestions!

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8楼2011-09-03 13:25:44

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zkydc810307

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蛋白的HPLC不要用C18，试试C8或者C4

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把蛋白纯化研究成操作工都能干的活

9楼2012-08-08 13:55:21

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