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lsx08

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1210489
注册: 2011-02-23
专业: 蛋白质组学

[求助] RP-HPLC分离蛋白质

我现在在做用RP-HPLC分离蛋白质，分离效果一直不理想（见谱图），已尝试多种流动相，结果是目标峰与前面的杂峰分离不开，达不到基线分离，希望各位高手可以指导一下，十分谢谢！色谱条件:C18色谱柱（4.6×250mm,300A）;流动相是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈;检测波长228nm，采用梯度洗脱。

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1楼2011-08-15 12:30:34

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labrat

木虫 (著名写手)

应助: 5 (幼儿园)
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虫号: 100291
注册: 2005-11-12
性别: GG
专业: 生物化学

Better solution is to change column to SEC column, else can try this combination for hydrophobic protein:
Buffer A: water, 50% formic acid
Buffer B: isopropanol, 5% formic acid
Gradient: 0-100% A to B

some use acetonitrile, you can try combination.