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william9798

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗?

我需要敲除的基因在一个菌的质粒上,采用同源重组的方法,插入一个抗性基因使其失活。我不知道操作方法与染色体上的基因敲除方法是不是一样的?有什么区别吗?能提供相关文献最好,谢谢
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-08-13 15:47:46
william9798(金币+10): 2011-08-21 03:55:08
本质上没区别,质粒上应该选择更多一些,比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的,直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变,在质粒上也很方便做点突变,好多试剂盒都可以做好几个点的突变!

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2楼2011-08-13 00:33:30
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william9798

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yguang at 2011-08-13 00:33:30:
本质上没区别,质粒上应该选择更多一些,比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的,直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变,在质粒上也很方便做点突变,好多试剂盒都可以做好几个点的突变!

我是通过同源重组的方法构建打靶载体,然后二亲接合,倒入受体菌中,与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换,达到使该基因失活的目的。
3楼2011-08-13 00:41:59
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yguang

木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by william9798 at 2011-08-13 00:41:59:
我是通过同源重组的方法构建打靶载体,然后二亲接合,倒入受体菌中,与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换,达到使该基因失活的目的。

是啊,这是最常规的方法啊!
4楼2011-08-13 08:49:26
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lwq652

木虫 (正式写手)

其实体内质粒重组有点难度的,因为涉及质粒的拷贝数,如果是单拷贝的,那么跟基因组差不多,但是如果是多拷贝的,那么只要有一个重组了就显示抗性了
一念错,便觉百行皆非,防之当如渡海浮囊,勿容一针之罅漏
5楼2012-04-05 11:56:40
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2011sp

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
1598975楼: Originally posted by lwq652 at 2012-04-05 11:56:40:
其实体内质粒重组有点难度的,因为涉及质粒的拷贝数,如果是单拷贝的,那么跟基因组差不多,但是如果是多拷贝的,那么只要有一个重组了就显示抗性了

这个不是问题
6楼2012-04-05 15:24:31
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coreopsisy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1598975楼: Originally posted by lwq652 at 2012-04-05 11:56:40:
其实体内质粒重组有点难度的,因为涉及质粒的拷贝数,如果是单拷贝的,那么跟基因组差不多,但是如果是多拷贝的,那么只要有一个重组了就显示抗性了
这个不是问题

为什么说不是问题,1598975说的问题确实存在,若要敲除质粒中的上的一个基因,若质粒是多拷贝,部分质粒上基因能被敲除,部分仍含有此段基因的质粒仍能存在,敲除工作不能成功,,
7楼2012-06-26 14:53:35
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coreopsisy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1599077楼: Originally posted by 2011sp at 2012-04-05 15:24:31
这个不是问题...

为什么说不是问题,1598975说的问题确实存在,若要敲除质粒中的上的一个基因,若质粒是多拷贝,部分质粒上基因能被敲除,部分仍含有此段基因的质粒仍能存在,敲除工作不能成功,,
8楼2012-06-26 14:54:45
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预防凯凯

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by coreopsisy at 2012-06-26 14:54:45
为什么说不是问题,1598975说的问题确实存在,若要敲除质粒中的上的一个基因,若质粒是多拷贝,部分质粒上基因能被敲除,部分仍含有此段基因的质粒仍能存在,敲除工作不能成功,,...

我的也是,我用Red同源重组进行敲除,一直缺失不掉,我的耐药基因在质粒和染色体上都有怎么办,有办法都缺掉吗?
9楼2014-03-24 21:08:05
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