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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗？
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william9798

铜虫 (小有名气)

[求助] 质粒上的基因敲除与染色体上的基因敲除有什么区别吗？

我需要敲除的基因在一个菌的质粒上，采用同源重组的方法，插入一个抗性基因使其失活。我不知道操作方法与染色体上的基因敲除方法是不是一样的？有什么区别吗？能提供相关文献最好，谢谢
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1楼 2011-08-13 00:18:03
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coreopsisy

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1598975楼: Originally posted by lwq652 at 2012-04-05 11:56:40:
其实体内质粒重组有点难度的，因为涉及质粒的拷贝数，如果是单拷贝的，那么跟基因组差不多，但是如果是多拷贝的，那么只要有一个重组了就显示抗性了
这个不是问题

为什么说不是问题，1598975说的问题确实存在，若要敲除质粒中的上的一个基因，若质粒是多拷贝，部分质粒上基因能被敲除，部分仍含有此段基因的质粒仍能存在，敲除工作不能成功，，
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7楼2012-06-26 14:53:35
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-08-13 15:47:46
william9798(金币+10): 2011-08-21 03:55:08
本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，好多试剂盒都可以做好几个点的突变！
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william9798
2楼2011-08-13 00:33:30
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william9798

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by yguang at 2011-08-13 00:33:30:
本质上没区别，质粒上应该选择更多一些，比如要敲除的基因内部如果有相同酶切位点的，直接用这个酶切后连接即得到此基因部分缺失的突变，在质粒上也很方便做点突变，好多试剂盒都可以做好几个点的突变！

我是通过同源重组的方法构建打靶载体，然后二亲接合，倒入受体菌中，与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换，达到使该基因失活的目的。
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3楼2011-08-13 00:41:59
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yguang

木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by william9798 at 2011-08-13 00:41:59:
我是通过同源重组的方法构建打靶载体，然后二亲接合，倒入受体菌中，与受体菌株的野生型质粒上的目的基因发生双交换，达到使该基因失活的目的。

是啊，这是最常规的方法啊！
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4楼2011-08-13 08:49:26
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