| 查看: 1420 | 回复: 3 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
引物及载体/宿主菌选择（用于酶表达）
|
||
|
本人查到的Alcaligenes faecalis DA1 D-氨基酰化酶序列只有CDS区，为了表达这种酶， 设计引物是不是就没得选择，上游引物只能是从ATG开始的一段序列，下游引物就是终止密码前的一段序列了（用软件看这两段引物得分都很低，目的基因可能不好P）。相应地载体该如何选择，比如怎么判断载体上有没有合适的启动子，我打算就用实验室的PET 30a做表达，宿主菌就用BL21，这样选择有没有什么问题。下面附上了我查到的目的序列， FEATURES Location/Qualifiers source 1..1455 /organism="Alcaligenes faecalis" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:511" CDS 1..1455 /EC_number="3.5.1.81" /note="DaaAF" /codon_start=1 /transl_table=11 /product="D-aminoacylase" /protein_id="AAK15530.1" /db_xref="GI:13194736" /translation="MSQPDATPFDYILSGGTVIDGTNAPGRLADVGVRGDRIAAVGDLSASSARRRIDVAGKVVSPGFIDSHTHDDNYLLKHRDMTPKISQGVTTVVTGNCGISLAPLAHANPPAPLDLLDEGGSFRFARFSDYLEALRAAPPAVNAACMVGHSTLRAAVMPDLRREATADEIQAMQALADDALASGAIGISTGAFYPPAAHASTEEIIEVCRPLITHGGVYTHMRDEGEHIVQALEETFRIGRELDVPVVISHHKVMGKLNFGRSKETLALIEAAMASQDVSLDAYPYVAGSTMLKQDRVLLAGRTLITWCKPYPELSGRDLEEIAAERGKSKYDVVPELQPAGAIYFMMDEPDVQRILAFGPTMIGSDGLPHDERPHPRLWGTFPRVLGHYSRDLGLFPLETAVWKMTGLTAAKFGLAERGQVQPGYYADLVVFDPATVADSATFEHPTERAAGIHSVYVNGAAVWEDQSFTGQHAGRVLNRAGA" ORIGIN 1 atgtcccagc ccgacgccac cccgttcgac tacatacttt ccggcggcac cgtcatcgac 61 ggcacgaacg cgccaggccg gctcgccgac gtgggcgtgc ggggcgatcg gattgccgcc 121 gtcggcgacc tgagcgccag cagcgcccgc cggcgcatcg acgtggcggg aaaagtggtg 181 tctccgggct tcatcgactc gcacacgcat gacgacaact acctgctgaa acaccgcgac 241 atgacgccca agatctcgca gggcgtcacc accgtggtca cgggcaactg cggtatcagt 301 ctcgccccgc tggcgcacgc caatccgccc gcgccgctgg atctgctgga cgaaggcggc 361 tcgttccgct ttgcacgctt ctcggactac ctcgaagccc tgcgcgccgc gccgcctgcc 421 gtcaacgccg cctgcatggt gggccattcc accctgcgcg ccgccgtcat gcccgacttg 481 cggcgcgaag ccacggccga tgaaatccag gccatgcagg cgctggccga cgatgcgctg 541 gccagtggcg ccatcggcat ttccacaggc gccttctatc cgcccgccgc ccatgccagc 601 accgaggaaa tcatcgaagt ctgccgcccc ctgatcacgc atggcggcgt ctacgccacc 661 catatgcgcg atgagggcga acatatcgtc caggcgctgg aggagacctt ccgcatcggc 721 cgcgaactgg acgtgccggt cgttatctcg caccacaagg tcatgggcaa gctcaatttc 781 gggcgctcca aggaaacgct ggccttgatc gaggcggcca tggccagcca ggacgtatcg 841 ctggacgcct atccctacgt ggcgggctcc accatgctca agcaggaccg cgtcctgctt 901 gccggccgca cgcttatcac ctggtgcaag ccctatcccg aactgagcgg acgcgacctg 961 gaagaaatcg ccgccgagcg aggcaagtcc aagtacgacg tggtgcccga actgcagccc 1021 gccggcgcca tctacttcat gatggacgag cccgacgtgc agcgcatcct ggcgttcggc 1081 cccaccatga tcgggtccga tggcctgccc cacgacgagc gcccccaccc tcgcctgtgg 1141 ggaacgtttc cccgggtgct gggccactac tcgcgcgacc tgggcctgtt cccattggag 1201 accgcggtct ggaaaatgac cggcctgacc gccgccaaat tcggcctggc cgaacggggc 1261 caggtgcagc ccggctacta cgccgacctg gtggtcttcg acccggccac ggtggcggac 1321 tcggccacgt tcgagcatcc caccgagcgc gccgcgggca tccattcggt ctacgtcaac 1381 ggcgcggccg tctgggaaga ccagtcgttc actggccagc atgccggccg cgtcctcaac 1441 cgggccggag cctga |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有206人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 用18T载体的通用引物进行筛选阳性菌液，跑出来的条带大小不对。。。
已经有13人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 兼并引物PCR连T载体后，怎么鉴定有没有连上
已经有20人回复
- 请教一下构建、表达方面的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌有的是表达载体的宿主，有些事克隆载体的宿主，他们的区别在哪�
已经有10人回复
- 微生物学考研资料1(沈萍版同步）免币分享
已经有67人回复
4楼2011-08-24 09:40:38
西瓜
荣誉版主 (知名作家)
- MolEPI: 50
- 应助: 94 (初中生)
- 贵宾: 3.157
- 金币: 1849.6
- 散金: 11458
- 红花: 116
- 沙发: 21
- 帖子: 7553
- 在线: 1449.5小时
- 虫号: 271749
- 注册: 2006-08-13
- 性别: GG
- 专业: 细胞衰老
- 管辖: 分子生物
飞翔的诗人2楼2011-08-12 18:16:38
3楼2011-08-13 16:33:25
