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引物及载体/宿主菌选择（用于酶表达）
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本人查到的Alcaligenes faecalis DA1 D-氨基酰化酶序列只有CDS区，为了表达这种酶， 设计引物是不是就没得选择，上游引物只能是从ATG开始的一段序列，下游引物就是终止密码前的一段序列了（用软件看这两段引物得分都很低，目的基因可能不好P）。相应地载体该如何选择，比如怎么判断载体上有没有合适的启动子，我打算就用实验室的PET 30a做表达，宿主菌就用BL21，这样选择有没有什么问题。下面附上了我查到的目的序列， FEATURES Location/Qualifiers source 1..1455 /organism="Alcaligenes faecalis" /mol_type="genomic DNA" /db_xref="taxon:511" CDS 1..1455 /EC_number="3.5.1.81" /note="DaaAF" /codon_start=1 /transl_table=11 /product="D-aminoacylase" /protein_id="AAK15530.1" /db_xref="GI:13194736" /translation="MSQPDATPFDYILSGGTVIDGTNAPGRLADVGVRGDRIAAVGDLSASSARRRIDVAGKVVSPGFIDSHTHDDNYLLKHRDMTPKISQGVTTVVTGNCGISLAPLAHANPPAPLDLLDEGGSFRFARFSDYLEALRAAPPAVNAACMVGHSTLRAAVMPDLRREATADEIQAMQALADDALASGAIGISTGAFYPPAAHASTEEIIEVCRPLITHGGVYTHMRDEGEHIVQALEETFRIGRELDVPVVISHHKVMGKLNFGRSKETLALIEAAMASQDVSLDAYPYVAGSTMLKQDRVLLAGRTLITWCKPYPELSGRDLEEIAAERGKSKYDVVPELQPAGAIYFMMDEPDVQRILAFGPTMIGSDGLPHDERPHPRLWGTFPRVLGHYSRDLGLFPLETAVWKMTGLTAAKFGLAERGQVQPGYYADLVVFDPATVADSATFEHPTERAAGIHSVYVNGAAVWEDQSFTGQHAGRVLNRAGA" ORIGIN 1 atgtcccagc ccgacgccac cccgttcgac tacatacttt ccggcggcac cgtcatcgac 61 ggcacgaacg cgccaggccg gctcgccgac gtgggcgtgc ggggcgatcg gattgccgcc 121 gtcggcgacc tgagcgccag cagcgcccgc cggcgcatcg acgtggcggg aaaagtggtg 181 tctccgggct tcatcgactc gcacacgcat gacgacaact acctgctgaa acaccgcgac 241 atgacgccca agatctcgca gggcgtcacc accgtggtca cgggcaactg cggtatcagt 301 ctcgccccgc tggcgcacgc caatccgccc gcgccgctgg atctgctgga cgaaggcggc 361 tcgttccgct ttgcacgctt ctcggactac ctcgaagccc tgcgcgccgc gccgcctgcc 421 gtcaacgccg cctgcatggt gggccattcc accctgcgcg ccgccgtcat gcccgacttg 481 cggcgcgaag ccacggccga tgaaatccag gccatgcagg cgctggccga cgatgcgctg 541 gccagtggcg ccatcggcat ttccacaggc gccttctatc cgcccgccgc ccatgccagc 601 accgaggaaa tcatcgaagt ctgccgcccc ctgatcacgc atggcggcgt ctacgccacc 661 catatgcgcg atgagggcga acatatcgtc caggcgctgg aggagacctt ccgcatcggc 721 cgcgaactgg acgtgccggt cgttatctcg caccacaagg tcatgggcaa gctcaatttc 781 gggcgctcca aggaaacgct ggccttgatc gaggcggcca tggccagcca ggacgtatcg 841 ctggacgcct atccctacgt ggcgggctcc accatgctca agcaggaccg cgtcctgctt 901 gccggccgca cgcttatcac ctggtgcaag ccctatcccg aactgagcgg acgcgacctg 961 gaagaaatcg ccgccgagcg aggcaagtcc aagtacgacg tggtgcccga actgcagccc 1021 gccggcgcca tctacttcat gatggacgag cccgacgtgc agcgcatcct ggcgttcggc 1081 cccaccatga tcgggtccga tggcctgccc cacgacgagc gcccccaccc tcgcctgtgg 1141 ggaacgtttc cccgggtgct gggccactac tcgcgcgacc tgggcctgtt cccattggag 1201 accgcggtct ggaaaatgac cggcctgacc gccgccaaat tcggcctggc cgaacggggc 1261 caggtgcagc ccggctacta cgccgacctg gtggtcttcg acccggccac ggtggcggac 1321 tcggccacgt tcgagcatcc caccgagcgc gccgcgggca tccattcggt ctacgtcaac 1381 ggcgcggccg tctgggaaga ccagtcgttc actggccagc atgccggccg cgtcctcaac 1441 cgggccggag cctga |
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3楼2011-08-13 16:33:25
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