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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 关于用农杆菌侵染法获得转基因植物的几点问题
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嫘诺

新虫 (小有名气)

[求助] 关于用农杆菌侵染法获得转基因植物的几点问题

虫友们，先遇到些难题，希望有懂得的给指点指点。现在这谢谢大家了。
现在我正在做转基因水稻，水稻品种为日本晴，实验过程中遇到了几点问题
1植株的分化率很低，具体没统计，不过一个皿里30-40块愈伤也就有3个出芽的。有的皿里一个也不出。
2分化的比较的慢，大约1个月才会有芽点出现，芽点出来后吧，长成小苗的时间也比较久。
3关于农杆菌侵染时的最佳OD值，是0.5呢还是0.8.OD值应该反映的菌的生长时期吧，那侵染时是不是采用的对数期的菌，那时OD值是多少呢？
4关于继代有文献称继代4次最好，有的则说可以去掉继代，各位又做转基因水稻的都继代几次啊？
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1楼 2011-08-06 18:23:36
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嫘诺

新虫 (小有名气)
★
jhu132llh(金币+1): 鼓励积极参与讨论 2011-12-29 10:12:16
引用回帖:
3楼: Originally posted by liling77ll at 2011-08-09 16:02:54:
我们一般采用，OD600=0.5左右，应该是菌生长最多的时候，分化率本来就不高的，只要得到的是阳性苗，只有一株都是成功的，按照自己正确的实验方法去做就好

非常感谢。实验方法是师姐留下来的方案，培养基配方啊，培养的过程，但是文献中报道的方法各有差异，比方说开始诱导愈伤时采用NB培养基，有的则用N6，分化培养基所加激素也不同，关键就是激素的比例，到底哪种比是最佳的。不知道仁兄实验室里采用的比较成熟的转化体系是是么样的？可否告知，万分感谢!!
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5楼2011-08-10 19:24:47
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zqt123_1981

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2): 鼓励积极应助 2011-12-26 10:32:37
引用回帖:
1楼: Originally posted by 嫘诺 at 2011-08-06 18:23:36:
虫友们，先遇到些难题，希望有懂得的给指点指点。现在这谢谢大家了。
现在我正在做转基因水稻，水稻品种为日本晴，实验过程中遇到了几点问题
1植株的分化率很低，具体没统计，不过一个皿里30-40块愈伤也就有3个 ...

帮你顶一下，我觉得分化率低的话，介导过程出现转基因苗的机会也很低啊，能不能提高一下分化率。在考虑农杆菌介导。
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2楼2011-08-08 13:59:02
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liling77ll

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
嫘诺(金币+20): 5 2011-08-10 19:14:10
jhu132llh(金币+2): 鼓励积极应助 2011-12-26 10:32:48
我们一般采用，OD600=0.5左右，应该是菌生长最多的时候，分化率本来就不高的，只要得到的是阳性苗，只有一株都是成功的，按照自己正确的实验方法去做就好
赞一下(1人) 回复此楼
做最好的自己，和自己的昨天对比
3楼2011-08-09 16:02:54
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lihuaannie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
jhu132llh(金币+2): 鼓励积极应助 2011-12-26 10:33:02
OD600=0.5左右，浸染时候愈伤的状态将会直接影响后面的分化，所以控制愈伤侵染时的状态非常重要。不知道你用什么筛选剂，HYG和G418分化率应该都还可以
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4楼2011-08-10 13:28:12
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