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zgb1982木虫 (正式写手)
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[求助]
计算引物退火温度时末端加的酶切位点计算在内吗？
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| 求助，RT！加的酶切位点要不要算在内。 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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gwbk
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:09:54
zgb1982(金币+1): 2011-08-05 14:46:41
dhd997(金币+5, MolEPI+1): good 2011-08-05 08:09:54
zgb1982(金币+1): 2011-08-05 14:46:41
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都需要计算在内的 1，第一、二次扩增（循环），退火温度按互补碱基数计算（一般不包括酶切位点和保护碱基序列）。 2，第三次扩增分两种情况，以原始模板、第一次扩增的序列、第二次以原始模板扩增的序列，与第一步退火温度计算相同；以第二次扩增出来的序列（带有两端引物和保护碱基的全基因序列）为模板，此时引物与模板完全互补，退火温度按引物全部序列计算。 3，合成中后期，两端全部与引物互补的DNA片段占有绝对优势。 应该按照全部序列计算退火温度。 |
5楼2011-08-05 00:11:18
天使托
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T.Shen
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12zhangwei
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4楼2011-08-04 22:14:51
