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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 帮忙分析下这两幅电泳图
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liuwei78

铜虫 (小有名气)

[求助] 帮忙分析下这两幅电泳图

下面是质粒和PCR产物单酶切后的电泳图，其中第一幅图是质粒和PCR产物分别酶切2h和5h后的电泳图，第二幅是质粒和PCR产物酶切12h的电泳图。都跑的不清楚，特别是第二幅图。是因为酶切时间太长么？另外奇怪的是，每次加完loading buffer 上样，跑电泳时看到的溴酚蓝的指示条带都是弥散的，以前从未遇到这种情况过？是因为loading  buffer 坏了么，从而影响了我的电泳图？
请大家帮忙解释下啊。不甚感激！！！
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1楼 2011-07-26 16:06:48
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
liuwei78(金币+5): 2011-07-27 08:19:16
dhd997(金币+2): good 2011-07-30 13:29:07
marker跑地挺好的，胶和电泳液肯定没问题，点样点地太多吧，另外把酶失活后再跑试试，这带跑得挺像emsa 的。
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生命不息，探索不止。
5楼2011-07-26 23:06:29
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nicole1124

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 欢迎交流 2011-07-26 20:51:18
liuwei78(金币+5): 2011-07-27 10:52:20
把TAE换成新的，用久了也会出现这种条带弯曲的现象
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2楼2011-07-26 16:53:46
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liuwei78

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by nicole1124 at 2011-07-26 16:53:46:
把TAE换成新的，用久了也会出现这种条带弯曲的现象

TAE是新的。marker没有问题，应该不是这个原因吧。
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3楼2011-07-26 18:38:04
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空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-26 20:28:53
liuwei78(金币+5): 2011-07-27 10:52:39
应该是胶的原因，mark条带其实也有点拖，TAE是新配的还是跟上次用过的？另外你酶切怎么时间那么长，2h足矣，时间太长了容易产生星活性，不利于下一步的连接反应
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
4楼2011-07-26 20:01:18
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