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qwky2010

金虫 (著名写手)

[求助] 9k表达质粒 电转化km71

大家好，我用的是pPIC9k表达质粒 电转化km71之后是涂什么平板筛选重组子呢，谢谢了,　我之前涂的是YPD+G418 ,看文献怎么是MM之类 ，不知做何选择

[ Last edited by qwky2010 on 2011-7-24 at 10:18 ]
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天道酬勤
1楼2011-07-24 10:17:36
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by qwky2010 at 2011-07-24 11:01:18:
谢谢啊，能否提供些经验呀，我用这种方法筛了好多次  都不行 不知道该怎么改进呢

一般先MM培养基营养缺陷性筛选转化子，然后再用G418抗性筛选高拷贝转化子，也就是你文献上看的。
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9楼2011-07-24 14:52:05
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cdl007

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

qwky2010(金币+10): 谢谢你，不过这个载体的说明书上提供的是g418筛选的呀，我就不懂了，请指点，谢谢 2011-07-24 10:47:31
amisking: 2011-07-24 19:27:42
http://blog.sina.com.cn/s/blog_6007f6d00100i0el.html
质粒图谱中并无neo抗性位点，用g418筛选没用

可以用amp 蓝白斑法筛选
或者用卡那霉素筛选
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2楼2011-07-24 10:43:10
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qwky2010

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by cdl007 at 2011-07-24 10:43:10:
http://blog.sina.com.cn/s/blog_6007f6d00100i0el.html
质粒图谱中并无neo抗性位点，用g418筛选没用

可以用amp 蓝白斑法筛选
或者用卡那霉素筛选

为所提及的筛选：Spot 10 μl from each well on YPD plates containing Geneticin® at a final concentration of 0, 0.25, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5, 1.75, 2.0, 3.0, and 4.0 mg/ml. Spot in a regular pattern using the multi-channel pipette or a grid underneath the plate.
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天道酬勤
3楼2011-07-24 10:51:00
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

qwky2010(金币+10): 谢谢啦 我见文献有用MM平板筛选的，到底哪个好些呢 2011-07-24 10:59:32
amisking: 2011-07-24 19:27:48
楼上说的不完全正确！
pPIC9k转大肠杆菌是用卡那霉素筛选，转酵母就不能用卡那霉素筛选，只能用G418抗性筛选（原因是一个是原核生物一个是真核生物，有效的抗生素不一样），，而且还可以用不同浓度G418筛选多拷贝转化子。
电转化之后筛选重组子用YPD+G418事可以的。
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4楼2011-07-24 10:54:58
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