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luolh2004

金虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3625.2
散金: 1009
红花: 4
沙发: 3
帖子: 2036
在线: 235.8小时
虫号: 349241
注册: 2007-04-19
专业: 细胞增殖、生长与分化

[求助] 细胞培养相关问题急！！！！！

各位虫友们好啊，我现在进行Balb/c3T3细胞培养实验，现在遇到一系列麻烦事，特地向大家请教，谢谢了哦。
1.细胞培养使用的双抗溶液（购买的），有效期已经过了，还能够使用吗？因为没有注意到，我已经用了好长一段时间了。同样，如果类似R1640和DMEM培养基过期了，是不是就不能继续使用了？
2.近期发现细胞状态非常不好，有很多死细胞，不管是刚复苏的细胞还是已经复苏一段时间的细胞，死细胞都很多。细胞生长速度没受什么影响，算是比较正常，就是不知道为什么会有那么多死细胞，实在是找不出什么原因。
3.我目前正在做hegf表皮细胞生长因子活性检测实验，使用的方法是MTT法，细胞是Balb/c3T3细胞，但是每次做的实验结果都发现，加入生长因子样品和标准品的数值没有维持培养基的高。希望有同样做这个实验的虫友们，给点意见，或者是有机会大家多多交流下，谢谢了。
MTT实验我已经做了大半年了，中间总是不断有问题出现，现在还是没有能完成，非常着急，有做过类似实验的虫友们，一定要帮帮我呀，非常感谢了！

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努力修炼，等待升级！

1楼 2011-07-23 18:40:37

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terry130

木虫 (正式写手)

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专业: 细胞死亡

【答案】应助回帖

luolh2004(金币+15): 谢谢交流回帖，我觉得你们的意见都很好，可能是我描述太简单了，等有机会再做个详细描述吧 2011-07-30 10:54:13

1 双抗过期也没事的，medium过期的就别用了
2 就算再好的冻存条件，刚复苏的第一代细胞也必然有很多死的，第二代时也会残留一些。多传几代就好了。只要活细胞生长速度没影响就没大问题，忍受不了的话就等状态好了之后再重新冻存一批好了。
3 MTT的手技要求很高的，个人感觉是一个重复性较差的实验方法。你必须保证用于实验的各组细胞和各批次细胞尽量处于同一的状态。比如都是从stock中用同样方式复苏同样代数的细胞。而且MTT的几次换液操作也要尽量统一，尽量快，最好是用排枪。MTT时尽量不要用整块96孔板，用中央的25个左右效果最好。这样才能尽可能的保证重复性。至于对照组和处理组之间的差别，只要重复性能够实现，你就应该尊重实验事实，去找可能的原因。