24小时热门版块排行榜    

查看: 1460  |  回复: 4

wkl1984

金虫 (小有名气)

[求助] RT后扩增到的条带出现非特异性,该如何处理

做完RT后,进行PCR,结果又非特异性条带出现,同时好像有很多弥散。请大家帮忙分析,用的是PCR Mix扩增的,条带大致在300-400之间,可是出现的条带在100附近了,请求分析。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

逍遥狂骑

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


dhd997(金币+1): 鼓励 2011-07-25 08:14:02
wkl1984(金币+50): 1 2011-07-31 12:43:17
要提高退火温度吧,增强特异性
2楼2011-07-24 17:02:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-25 08:14:13
没有目的条带,100bp的条带有可能是引物二聚体哦,降低一下退火温度,再扩不出来就重新设计引物吧
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
3楼2011-07-24 17:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

12zhangwei

新虫 (小有名气)

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-25 08:14:24
如果只是扩增某个基因,在300-400bp有你想要的条带先连载体测序一下,有点非特异扩增也没关系。要是没有你的目的条带认真看设计的引物,blast一下,或调整退火温度
4楼2011-07-24 20:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

icosahedron

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
dhd997(金币+3): good 2011-07-25 16:07:11
1 是否目的基因的浓度太低,以至于扩不出来?用个内参引物验证下cDNA的质量。

2 引物的问题,有时候引物不对劲,横劈竖劈就是不出来,只能重新设计引物了。

3 PCR体系的问题?没有找到最适扩增条件,可以尝试做梯度PCR,以及更改Mg离子浓度。

4 第二种情况的可能性最大。
愚公移山
5楼2011-07-25 12:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wkl1984 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[硕博家园] 深圳大学硕士招生(2026秋,传感器方向,仅录取第一志愿) +4 xujiaoszu 2026-03-11 8/400 2026-03-16 09:45 by xujiaoszu
[考研] 290求调剂 +5 孔志浩 2026-03-12 10/500 2026-03-16 09:01 by 余晖&
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-10 11/550 2026-03-14 12:18 by 邱gl
[考研] 211本,11408一志愿中科院277分,曾在中科院自动化所实习 +3 Losir 2026-03-12 3/150 2026-03-14 12:11 by 热情沙漠
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 0856材料与化工301求调剂 +5 奕束光 2026-03-13 5/250 2026-03-13 22:00 by 星空星月
[考研] 332求调剂 +3 Zz版 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:36 by 18595523086
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 一志愿河海大学085900土木水利专硕279求调剂不挑专业 +4 SunWwWwWw 2026-03-10 8/400 2026-03-13 02:23 by SunWwWwWw
[考研] 一志愿:武汉理工,材料工程,英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
请填处理意见