应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建的相关问题
51/1返回列表
查看: 3578  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

friya0910

新虫 (正式写手)

[求助] 表达载体构建的相关问题

现在要构建表达载体，有一些问题不是很明确，希望懂得的不吝赐教啊！
首先是双酶切表达载体和带有目的片段的T载体，一般都切多少时间啊？我看有说切过夜的，也有切几个小时的！切完以后大家都从哪些方面确定酶切完全不完全呢？
其次是连接以后除了直接转化以外，还有什么方法确定是否连接上了呢？
本人新手一个，对于这方面不是很了解，希望各位帮帮忙！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-18 15:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-07-18 16:32:39
friya0910(金币+1): 2011-07-19 17:10:57
引用回帖:
Originally posted by friya0910 at 2011-07-18 15:27:39:
菌落PCR的话就还是要把连接液做转化喽，看来没有什么捷径啊！我的片段不大，才300bp，“中间隔4-5个小时”是什么意思啊？

就是酶切时间4或5个小时啦，你的片段这么小哇。那你怎么做连接啊？
赞一下(1人) 回复此楼
生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
4楼2011-07-18 15:36:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

青菜小虫

银虫 (著名写手)

风居住的街道

【答案】应助回帖

★ ★
friya0910(金币+2): 2011-07-18 15:25:29
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-07-18 16:32:08
friya0910(金币+1): 2011-07-19 17:10:50
如果你的片段大的话就过夜切吧，我一般都是过夜切，用fermentas的酶。如果不过夜切的话，中间隔4-5个小时就差不多吧。确定连接与否，你可以做一下菌落pcr，p一下你的目的条带。好好做，加油！
赞一下(1人) 回复此楼
生命即这般无尽变数，辗转来去皆苛求不得
2楼2011-07-18 15:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 青菜小虫 at 2011-07-18 15:18:40:
如果你的片段大的话就过夜切吧，我一般都是过夜切，用fermentas的酶。如果不过夜切的话，中间隔4-5个小时就差不多吧。确定连接与否，你可以做一下菌落pcr，p一下你的目的条带。好好做，加油！

菌落PCR的话就还是要把连接液做转化喽，看来没有什么捷径啊！我的片段不大，才300bp，“中间隔4-5个小时”是什么意思啊？
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-18 15:27:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

friya0910

新虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 青菜小虫 at 2011-07-18 15:36:51:
就是酶切时间4或5个小时啦，你的片段这么小哇。那你怎么做连接啊？

片段小就不能做连接吗？有这么一说么？
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-18 15:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭