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千king寻

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, EPI+1): Good!金属浴没听说过，孤陋寡闻了……连接时我们一般放15度培养箱。 2011-07-20 16:13:11
friya0910(金币+5): 2011-07-20 17:59:26
双酶切37度水浴2——3个小时，之后琼脂糖凝胶电泳观察条带，若条带正确则切胶回收，此时回收的为带有两个酶切位点的目的片段。该目的片段与已经带有该酶切位点的载体进行连接，若用T4连接酶，则需16度金属浴过夜连接，之后进行转化、培养皿过夜培养，挑取3个左右生长良好、单个的菌落于5毫升左右的培养液中37度摇床培养6个小时，进行PCR鉴定是否成功，若电泳观察条带正确则抽质粒，即为连到载体且含有酶切位点的质粒，也可再次进行双酶切鉴定。
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7楼2011-07-20 14:04:28
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